第一篇:2 - 复制
踏莎行(雾失楼台)导学案
教学目标
知识目标:知人论世,走近作者;理解词人抒发的惆怅忧愁的心情;
技能目标:体会用对句写景抒情的妙处:鉴赏词中名句“一川烟草,满城风絮,梅子黄时雨。”;
情感目标:品味清丽典雅、婉曲蕴藉的写作风格。鉴赏这首词的清丽的语言,熟读成诵。教学重点
把握幽微丰美的意蕴,体会以情韵取胜的写法。
教学难点
学习虚实结合的写法,鉴赏本词委婉曲折的笔法。教学方法
讲解法、诵读体悟法 课时安排
一课时
教学过程:
一.以介绍作者导入:
秦观(1049-1100):北宋词人。字
、,号
,扬州高邮(今属江苏高邮)人。三十六岁中进士。曾任蔡州教授、太学博士、国史院编修官等职位。在新旧党之争中,因和苏轼关系密切而屡受新党打击,先后被贬到处州、郴州、横州、雷州等边远地区,最后死于藤州。秦观是“苏门四学士”之一,以词闻名,文辞为苏轼所赏识。其词风格婉约纤细、柔媚清丽,情调低沉感伤,愁思哀怨。向来被认为是婉约派的代表作家之一。、二.整体感知
1、找出主要意象和关键动词和形容词 ? 主要意象:
? 关键动词和形容词:
2、词的上阕中词人用了什么表现手法? 词上片中描写了哪些景色?这些景色哪些是实些,哪些是虚写?
虚:
实 :
由此看,词的上片除了借景抒情,还用了什么艺术手法?明确:
三.词文评讲
1、“雾失楼台,月迷津渡,桃源望断无寻处”,写得是眼前实景,还是意想之景?你从中读出作
者怎样的内心世界?
(1)“雾”、“月” 是指什么?
(2)“失”“迷”的用法及其表现作用
(3)“楼台”“津渡”喻指什么?
(4)“望断”写出了词人怎样的情态和心情?
2.“可堪孤馆闭春寒,杜鹃声里斜阳暮” 两句是如何从正面写词人羁旅郴州客馆不胜其悲的现实生活的?
(1)“闭”有何妙处?
(2)有人认为“斜阳暮”语义重复,你是如何认为的?
3.“驿寄梅花,鱼传尺素,砌成此恨无重数”用了哪两个典故?有什么作用?
(1)试问为什么寄的是“梅花”呢?
(2)想象一下,尺素里面写的是什么内容?
(3)“砌”字有何妙处?试作分析
4.怎样理解“郴江幸自绕郴山,为谁流下潇湘去” ?
五.课堂小结
这首词上阙写谪居中寂寞凄冷的环境,抒发了词人被贬到僻远之地的凄苦失望之情,情景交融;下阕由记叙开始,写远方友人的殷切致意、安慰,注入了词人对自己离乡远谪的深深怨恨和思念家乡的怅惘之情。整首词词风清丽典雅,婉曲蕴藉。
六.板书计划 踏莎行
上阕:写景融情:寂寞清冷的环境。下阕:记叙注情:远谪的怨恨和思乡之情 七.作业布置
横塘路 导学案
【作者简介】
贺铸(1052-1125),字,号。卫州共城(今河南辉县)人。博学强记,长于度曲。词多刻画闺情离思,也抒发怀才不遇之慨叹及纵酒狂放之作品。风格多样,情深语工。有《庆湖遗老集》、《东山词》。
一、【注释】 凌波: 横塘: 芳尘: 锦瑟华年:
琐窗: 冉冉:
梅子黄时雨:
二、【赏析】
1.上片中既有实写,也有虚写,请说明哪些句子是实写,哪些句子是虚写。
2.“但”字表达了作者怎样的心情?
3.设想美人的句子,表现了美人怎样的处境?最能表现这种处境的句子是哪句?。
4.词中化用了哪些前人的诗句和典故?
5.赏析“若问闲愁都几许?一川烟草,满城同絮,梅子黄时雨。”
三、总结
贺铸一生沉抑下僚,怀才不遇,只做过些右班殿臣、监军器库门、临城酒税之类的小官,最后以承仪郎致仕。将政治上的不得志隐曲地表达在诗文里,是封建文人的惯用手法。因此,结合贺铸的生平来看,这首诗也可能有所寄托。贺铸为人耿直,不媚权贵,“美人”、“香草”历来又是高洁之士的象征,因此,作者很可能以此自比。居住在香草泽畔的美人清冷孤寂,不正是作者怀才不遇的形象写照吗?从这个意义上讲,这首词之所以受到历代文人的盛赞,“同病相怜”恐怕也是一个重要原因吧!
四、作业
五、教学反思
第二篇:复制申请书
复制申请书
天津市新闻出版管理局:
___________________委托___________________复制_______________光 盘__________张,媒体行态为____________,载体容量为__________。用于_____________________,为非卖品,版权归__________________ 公 司所有,若因此出现一切法律责任由我公司承担。
光盘内容说明:__________________________________________________ ___________________________保证不含以下内容:
1、反对宪法规定的基本原则的;
2、危害国家的统一,主权和领土完整的;
3、泄露国家机密、危害国家安全或者损害国家荣誉和利益的;
4、煽动民族仇恨、民族歧视,破坏民族团结,或者侵害民主风俗、习惯 的;
5、宣扬邪教、迷信的;
6、扰乱社会秩序,破坏社会稳定的;
7、宣扬淫乱、赌博、暴力或者教唆犯罪的;
8、侮辱或者诽谤他人,侵害他人合法权益的;
9、危害社会公德或者民族优秀文化传统的;
10、有法律、行政法规和国家规定禁止的其他内容的;特此申请,尽快批复为盼。
盖章
****年**月**日
第三篇:团队复制(推荐)
学习
内
容
王树芳
2011.11
通过5天4夜的紧张学习,《团队复制》里的有些内容深深地触动了我。虽然还有些不理解也要记下慢慢消化。
第一部分
由杨宗华老师讲解 开始就讲企业会议的功能: 1.转移目标。2.形成潜规则。3.传达政令。形成潜规则的五个过程
1.标准;2.强制;3.习惯;4.风气;5.文化。
我司现阶段:标准有但不规范;要强制执行的标准又没落实下去;
传达政令的三大原则: 1.要有积极和正面的语言传达。2.要用员工可以理解的语言传达。3.要用员工有力的方式传达。有效会议:
会而有议;议而有论;论而有行;行而必果;果而有报; 干部早会流程:
1.开场
(1)关怀问候
(2)出勤汇报 2.工作
(1)昨日工作小结
(2)今日工作计划 3.协调
(1)工作协调与部署
(2)今日工作重点提示
(3)谢归谢用。
小结:干部早会开得好;昨日准备少不了。干部早会开得好;今日工作没烦恼。
全员早会流程:
1.开场
鼓舞士气
2.导向
成功分享
3.4.学习
专业学习、专题学习、集体学习。训导
政令宣导、领导训勉、诵读公司愿景使命
会后早会运作原则
1.是各职能部门的班前工作会。
2.是落实具体指标、解决执行力和生产效率的会。3.会议的时间根据具体情况和需求定。4.该会议的内容无法复制和模仿。会后早会流程
1.2.通报
昨日工作成果、目标进度、查找和发现问题。跟紧
确认今日工作计划、工作量和工作导向。
辅导训练
共性问题辅导、新技术辅导、特出案例辅导、个别辅导 3.夕会的运作原则
1.是补短板和业绩差的人开的会。2.会议时间为1小时。3.夕会又称爱心激励会。
4.该会是由人力资源部或专业部门负责组织。夕会的流程
1.导入
激励
2.教育训练
根据实际问题点进行教育和训练。
3.追踪
学习心则和改进计划。业务启动大会的意义
是一个承上启下的大会;是一个振奋精神的大会;是吹起冲锋号角的大会;是凝聚企业文化的大会。业务启动大会的流程 1.开场
士气展示
2.表彰
业绩优异; 职业精神。
3.4.启动
军令状;PK式;表态式;及其他创意。战前动员
战前动员;全员宣誓
业务检讨会的流程
1.参会者(1)工作总结:
目标达成情况;目标具体原因分析;重大或创新的管理与
活动的执行情况
(2)工作计划:
下阶段目标;达成目标的具体措施与方法;重大或创新的管理与活动规划。
2.领导
(1)点评(2)工作导向提示(3)重点工作提醒(4)谢归谢用。
业务检讨会的提示
1.检讨会不能流于形式,会议程序必须到位。
2.每周、每月、每阶段必须固定时间召开,使主管养成习惯。3.会议要能找出问题,分析原因,拟定对策。
4.不要开成批评会,要能够帮助主管解决问题。
特殊经营会在神魔情况下召开? 1.人事出现重大变化或调整时。2.经营政策和策略出现重大变革时。3.公司希望发生变化或调整时。4.经营出现重大偏差时。5.经营绩效出现重大差异时。
开会的六大目的
1.开展有效沟通。2.传达政令和资讯。3.协调矛盾取得共识。4.资源共享、开发创意。5.影响团队、激励士气。
教育训练、培养人才;团队的执行力缺的是有效的沟通,做到上通下达、减少企业内耗。
第二部分团队复制
张荣老师主讲 团队的成功以下六条
1.抓对了时机。2.选对了行业。3.应对了模式。4.用对了价格。5.找对了团队。
6.做对了激励。
激励的三个层面
1.物质。2.能力。
3.精神。精神激励为最高,人是活在感觉中的动物,人要有归属感、荣誉感及参与感。
企业文化建设
1.军队文化 2.家庭文化 3.学校文化
军队文化: 奉献;忠诚;是保证完成任务。
1.升旗
2.士气展示
只有行为统一了,思想才能更好的统一。士气展示的要领:(1)视觉(2)听觉(3)内容 3.乐捐 4.挑战 5.公共承诺 6.颁奖 7.庆典
团队复制士气展示的任务
1.统一思想; 2.专人负责; 3.设立机制; 4.借力;时空落实; 6.以身作则 7.坚持。
挑战PK内容
1.服务PK 2.产品品质PK 3.业绩PK
5.分 4.利润PK 5.成本控制PK 6.才艺PK 7.技能PK 当满脑充满目标的时候,剩下的只有行动和方法;当满脑充满怀疑的时候,剩下的只有理由和借口。
家庭文化:快乐 感恩
你的事就是我的事。称呼; 2.拥抱; 3.舞蹈; 4。会餐; 5.分享; 称呼的距离代表心灵的距离;肢体的距离反映心灵的距离。
学校文化:诚信
一切给学习让路。
1.排名; 2.评比; 3.奖励;
价值观
1.使命:
使命决定命运。2.愿景:
达到什么程度。人才招聘七问
1.为什么要招人? 2.打算招多少人? 3.用什么渠道招? 4.用什么方法招? 5.派那些人去招? 6.计划多少费用? 7.如何培训录用?
招聘渠道:
1.人才市场;2.网络; 3.员工推荐;4.内部招聘;5.学校 6.猎头公司等; 公司培训系统: 1.新员工岗前培训。
2.新员工入职培训。3.专业技能培训。4.各种在职培训。5.其他培训。
第三部分:绩效管控与情境沟通
单海洋老师主讲 1. 企业家的成长历程及管理境界 2.企业家的定义是创办企业为大家。
3.企业家的心诀是正念慈心。企业就是创建平台在帮助别人实现梦想的同时,顺便实现自己的梦想。4.企业家的六个境界。
(1.)业商:经营自己,(2.)法商:经营资源。人力资源,社会资源,自然资源(3.)儒商:经营品牌,果断而不武断(4.)道商:经营资本,己欲立而立与人,欲达人而达己(5)圣商:经营核心法则,恩泽天下(6.)神商:经营信仰
5.创造事业就是创造梦想:创建平台,经营企业就是经营欲望,经营需求 6.三度:
(1)事业的高度永远不会超过志向的高度。
(2)事业的宽度永远不会超过胸怀的宽度。
(3)事业的厚度永远不会超过底蕴的厚度。
7.什么是绩效管控:支持他人实现梦想,顺便达成企业目标的智慧系统
8.绩效管控的四要素:1.管理活动,2.管理方法,3,管理智慧,4管理系统
9.老板的首要任务是什么?
一清二白
清晰一个远景,明白两个目标;即导向性目标(虚,使命是什么),实质性目标(实,指标是什么)二者如何结合.10.明白企业目标的几个关键性指标
1.财务指标(财产);2.客户指标(客户);3.运营与流程(营运),4学习与成长(员工).11.职业经理人目标:名和利,经营企业就是经营别人的需求,明白别人要什么,1.)动力(岗位薪酬,绩效薪酬,激励薪酬,股权薪酬)2.)福利(企业型福利,社会型福利)
12.工资五项原则:1.保障性,2.竞争性,3.激励性,4.公平性,5.经济型
13.CEO身份是什么?是问题的终结者,而不是发现者,制造者.14.CEO最重要的工作是什么:清晰责任解决问题清晰企业目
标并导入三大系统即:目标系统,动力系统,管控系统
15.管控系统的清晰管理之道:导入内部客户服务意识,提炼内部客户服务标准,践行内部客户服务机制
16.内部客服外部督察5原则
1.)制定标准:指标以及工件标准
2)聘请外部督察.3.)幽灵般工作。如现场拍照。摄像
4.)发现差异,现场执行(开具罚单等措施)
5.)现场不服,上诉加倍(经核实有错)
17.利润中心绩效管控体系设定的三则:
1.爱打仗;
2.会打仗;
3.有序作战.18.利润中心绩效管控体系设定必做的五件事:
1.设定组织架构,2.制定规章制度,3.设定激励机制,4.弘扬企业文化,5.导入系统学习
19.职业生涯规划四项原则:
1.用使命感召(使命);
2.用愿景吸引(愿景)
3.用榜样证明(榜样);4.拥挤驱动(机制)
20.企业家最重要的能力是什么?
1.理清使命;2.描绘愿景;
3.建立机制;
4.树立榜样
21.职业生涯规划核心:
利益是规划的前提(理性),精神是规划的灵魂(感性),感性与理想并重,精神与利益齐辉.22.小企业经营生意,经营事;
大企业经营事业,经营人。经营生意靠工资维持,情感维持; 经营事业靠精神引领,股权激励.23.股权激励的四大雷区:
1.)重利轻义,导向错位。
2.)奖励与激励,本质混淆,股权激励基于未来创造。
3.)股权统筹,目光短浅;只看现在不看未来。
4.)股权布局,层次单一。.体制决定统治,格局决定结局;
领导是领导思想,经营是经营筹码;
成本中心部分:(重要工作任务呈现)25.重要任务执行标准定义:是做到什么程度。
执行六大要素:1.数量。2.质量,3.时间,4.成本,5.上级满意度,6.客户满意度
执行三化原则:1.数据化,2.细化,3.流程化
26资源支持四要素:1.人
2.财
3.物
4.权 27.解决问题的三大通道:
1.民主权利委员会;
2.管理委员会;
3.找间接上司。
28.目标管控十二步
1.)清晰目标。2.)相关活动。3.)活动条件。4.)活动排序。5.)计划汇报。6.)组织资源。7.)工作指导。8.)分工协作。9.)进步监控。10).问题解决。
11.)评估衡量。(面谈的类型:1.以绩效目标为导向定期面谈;2.当出现绩效问题时,及时干预性面谈;面谈的目的:秋后算账把做完的事情; 助其成长。)12.)结果呈现。29.绩效面谈五部曲:
1)面谈准备。
2)下属自评。3)评估建议。4)处理结果。5)提交报告。
面谈准备:
1.目标回顾(主要工作任务/考核表)。2.收集相关事实和数据。
3.对其工作成果和工作行为表现作客观评价并预打分。4.根据相关事实和数据找出其做的好的地方并让其总结经验。5.根据相关事实和数据找出其可成长的地方、剖析其原因并制定。
改善措施。6.厘清下一阶段的工作目标。
7.帮助员工清晰收入目标并帮助其思考达成措施。8.提前一星期通知员工做好准备。
下属自评:
1.检查每项目标完成的情况和完成的程度(主要工作任务/考核表)
2.给自己工作成果和行为表现预打分
3.哪些方面表现好?为什么?
4.哪些方面需要改进?行动计划是什么?
5.制定下阶段的工作目标
6.需要的支持和资源是什么? 评估建议:
一).面谈时注意事项
1、检查自己,确信这是一次仅以改进绩效和帮助对方成长为目的的业性谈话
2、选择合适的时间和环境,保持一定的私密性,避免干扰;
3、开场营造轻松的氛围(讲些与工作无关的事情如八卦、笑话等)
4、鼓励下属充分参与;
5、认真聆听
6、关注下属长处,关注的是绩效而不是人格,采用恰当的情绪
(所有的管理者都是不称职的、哪怕他是小人)
7、谈话要具体、客观,态度要平和;
8、始终要把握面谈是双方的沟通,而非讲演;应用三明治法则
9、敢于自我批评;
10、达成共识
二).面谈的主要内容之本月目标(主要任务)完成情况
1)业绩与预期的差距。2)原因分析。3)改善措施。4)计算结果。
三).面谈的主要内容之本月行为表现
1.计算本月行为表现最终得分:
2.沟通需要改进和发展的领域: 四).面谈的主要内容之下月目标及达成措施:
1.帮助下属清晰下月的收入目标:
2.帮助下属制定目标的达成措施: 处理结果:
A优秀:1.总结和推广成功经验;
2.纳入晋级及人才梯队计划。
B一般:1.如何提高?
2.纳入进阶培训计划。
C较差: 1.什么原因?如何改进?
2.纳入提高培训计划。
D太差: 立即调整!纳入入职培训。
E长期问题:深入追究挖掘,专项解决。
结果呈现:进行信息汇总分析,提交总结报告。
你的未来,你的成就,你的收入,你所有的一切都取决于你给与他人结果的质量。领袖不为七情六欲所动,而使用七情六欲动别人。
30.成功应用绩效管控体系的4阶15步
第一阶:思想统一
第二阶:体系建设
第三阶:体系执行 第四阶:体系优化
总则:精细化设计、简单化运作、逐步化推进。循序渐进、持之以恒。
十五步: 1)厘清使命。2)描绘愿景。3)规划未来。
4)根据企业的战略规划提炼企业指导目标。5)根据企业指导目标进行工作规划。6)根据工作规划为下属部门导入三大系统。7)把部门指标分解为岗位指标。8)组织培训全员学习。9)试运行。
10)进度监控,问题解决。11)定期考核,沟通面谈。12)月度重点,奖金核算。13)半月度重点,调薪。
14)重点,调职、培训开发,职涯规划。15)系统升级。公司指标分3级:
企业指标:企业指标是根据企业的战 略规划及战略目标而提炼。部门指标:是根据部工作职责而提炼。
岗位指标:是根据岗位的工作任务而提炼。
31.成功实施绩效管控的角色扮演及岗位分工:
老板主导责任者
干部主体执行者
HR组织推动者
厘清企业使命
明确岗位职责
制定规章制度
描述企业愿景
分解部门目标
组织实施培训
制定职涯规划
制定行动方案
计算考核结果
确定战略目标
实施过程管控
整合系统信息
制定三大系统
进行绩效面谈
进行系统优化 32.生命智慧:
•什么是理解?在永远理解别人的同时还要永远理解别人对自己的不理解
•人的成功只有15%依靠专业技术,而85%是依靠人际交往、有效沟通等软科学本领。
•人生的快乐只有15%来自于成就感,而85%来自于与人愉快的相处及亲密关系。
•所以人生的美好乃是人际关系的美好而人生所有问题在某种意义上都是关系的问题
33.沟通箴言:
•沟通是疗愈关系最好的方法--海洋
•企业管理过去是沟通,现在是沟通,未来还是沟通---------------松下幸之助。
•沟通的品质决定生命的品质--海洋 34.沟通模式 :如何沟通?
一、背景/心境
二、感官信息(五官信息)我看到…/我听到…/我尝到…/我闻到…/我触到…。
三、诠释演绎(赋予意义)我相信…/我认为…/我推测…/我解释…
我想象…/我幻想…/我判断…/我假定 注意:没有对与错…只有同意和不同意 好奇心。
四、感受觉察
正向:喜欢、爱、敞开、温暖、吸引、舒服、接近
负向:不喜欢、恨、封闭、冷漠、排斥、不舒服、退离。
五、核对确认
六、意图表达 我打算怎么做、我想怎么做、我会怎么做。
七、下步行动。
35.老板的三重境界
大老板
做事靠本能——用师—王 —尽人之睿、功德。
中老板
做事靠道义——用友—霸 —尽人之力、智慧。小老板
做事靠良心——用徒—亡 —尽己之能、能力。
36.被迫生智的执行步骤:
1.让他学会清晰地定义问题。2.让他把问题写下来。
3.让他在问题的下面写下所有可能解决问题的方案。4.让他在用三分之一加以的方法选出你认为重要的问题。
5.让他3个满意方案中选出一个最佳方案。6.以上方案都做完以后还没解决问题,再敲我的门。37.共振生智万能问题解决法:
1)问题定义
每个人写五个问题。
2)问题汇总
所有问题写到黑板上(不重复)
3)用三分之一加一的方法选出你认为重要的问题,后统计结果。4)根据问题每个人写五个答案。
5)答案汇总 每个人的答案写到黑板上(不重复)6)用三分之一加一的方法选出你认为重要的答案。7)再选出三个最佳答案,可执行的立即执行。
8)在选出三个最佳答案中,不可执行的重复万能问题解决法。9)对于需长时间规划或其他原因无法现场互动的主题,可根据其问题属性分配予主管负责人。并设定期限、检查进度。
第四篇:DNA 复制
第六章 DNA的复制、修复和重组
细胞在复杂多变的环境中维持生命活动的秩序是依赖于DNA所携带的大量遗传信息的准确复制,这种复制过程被称为DNA复制。这个过程必须发生在一个细胞产生两个遗传学上完全相同的子代细胞之前,在细胞中维持秩序也需要对它的遗传信息进行不断地监督和修复,DNA易受来自环境中的化学药品和放射物的损害,也易受细胞内产生的活性分子的损害。在这一章中,我们讲述细胞中用于DNA复制和修复的蛋白质机器,这些蛋白质机器催化一些细胞内发生的快速而精确的过程。
尽管这些系统能保护遗传物质以防止发生复制错误和偶然的损害,但永久的改变或突变有时也会发生。尽管许多突变不会以任何显著的方式影响生物体,但有一些也有意义深远的影响,有时候,这些改变有益于生物体:例如突变能是细菌对用来杀死它们的抗菌素产生抵抗力。实际上,在DNA中这些改变的积累已超过数百万年,因而使遗传物质多样化,使一个物种与另一个物种截然不同。突变也可产生小的变异,这些变异可造成同一物种中不同个体间的许多差异。这我们可在人类和其他动物中很容易看到遗传信息从一代忠实的传到下一代。DNA的差异能产生变异,这种变异构成同一物种不同个体间的差异,久而久之,一个物种和其他的物种间形成差异。在一个家庭中,小孩间会长的比较像,这是由于他们遗传了他们父母的特有的基因。猫和人类有许多相同的特征,但经过数百万年的进化,使人和猫分开,这些遗传变化现在是我们和猫成为不同的物种。鸡是与我们亲缘关系更远的动物。然而,突变也是有害的:在人类中,他们引起几千种遗传疾病和许多类型的癌症。因此,一个细胞或一个生物体的存活取决于是否能将DNA的变化保持在最小值。如果没有不断地监督和修复受损DNA的细胞系统,生命就可能不存在。
我们通过学习这些负责复制和使DNA维持在最小变化的机制来开始学习这一章。
第一节 DNA复制
在每次细胞分裂中,细胞必须非常精确的复制它的基因组,在这一节中,我们将学习一下细胞如何完成它的工作,以每秒1000核苷酸的高速率复制DNA。
一、碱基配对使DNA复制
在前面的章节中,我们看到每股DNA双螺旋结构都包含两条核苷酸链,它们是准确互补配对的。每条链都可以作为一条新互补链合成的模板。图6-2,一条DNA链可作为模板,结合优先发生在能形成碱基对的核苷酸间(A与T,G与C),每一条链都可作为模板合成与它互补的链。
换句话说,如果我们指定两条DNA链分别为S和S’,S链可作为模板合成一条新的S’链,而S’链也可以作为模板合成一条新的S链。图6-3,DNA作为自身复制的模板。双螺旋结构中的每条DNA链都可合成它的互补链特定核苷酸序列的模板。
DNA中的遗传信息通过这种简单的过程就可以得到精确的复制。链S从链S’上分离,然后每个分开的DNA链有各自作为模板合成另一条新的互补链,这条互补链和先前与它配对的链核苷酸序列相同。
一个DNA分子的每条链作为合成其互补链的模板,这使细胞得到复制,它的基因也通过DNA复制传给后代。在一次细胞分裂中,涉及复制数万亿的核苷酸对,这种复制过程必须快速而准确的进行。这项工作是由一群蛋白质聚集在一起形成的复制机器来完成的。
DNA复制从母本DNA分子产生两个完整的双螺旋,除了稀少的复制错误外,每个新的DNA双螺旋结构在核苷酸序列上与母本DNA双螺旋完全相同。因为每条母本DNA链作为一条新链合成的模板,每个子代DNA双螺旋都包含一条母本DNA链和一条新合成的链,这种复制方式被称为半保留复制。图6-4,在每轮复制中,DNA中的每条链都作为合成其互补链的模板。原DNA链通过许多代细胞,仍能保持完整,DNA是半保留复制的,因为每个子代DNA双螺旋都由一条来自母本DNA的链和一条新合成的链组成。在P200-P202,How we know?中我们看一下第一次用来描述DNA以半保留复制方式复制的实验。
在1953年,Watson 和Crick发表了描述DNA结构模型的一篇著名文章。如图5-2。在这篇文章中,他们提到了互补碱基—A和T、G和C—顺着双螺旋结构的中心互补配对,使这两条DNA链紧密地结合在一起。接着他们又通过这种特殊的配对方式提出了遗传物质的一种可能的复制机制。
一个月后,这篇著名的文章发表在Nature杂志上,Watson 和Crick提出DNA可能是如何复制的。在这篇文章中,提出:双螺旋结构的两条链解开,每条链都作为模板,合成与它互补的子链。在他们的模型中,把这种复制方式称为半保留复制,每个新DNA 分子是由一条原母本链和一条新合成的链组成。图6-6,对DNA复制作出的不同预测的三种模型。图6-6A,在半保留复制模型中,每条亲本DNA链都作为模板来合成一条新的子链。第一轮复制将产生两个杂合DNA分子,每一个杂合DNA分子都包含一条来自原母本的链和一条新合成的链。随后都一轮复制将产生两个杂合DNA分子和两个不包含原亲本DNA链的新DNA分子。
我们现在已经知道Watson 和Crick提出的DNA复制的模型是正确的。但起初这种模型并未被普遍地接受。尊敬的物理学家后来转变为遗传学家的Delbrück,作为其中的一人,他对此提出疑问:双螺旋结构的两条链,互相缠绕如此多次而扭成很长的一束,它可能在没有造成混乱的缠在一起的情况下解开DNA的两条链吗?Watson和Crick关于DNA打开的设想是DNA是像拉链一样解开的,而Delbrück认为这在物理上是不太可能的。
Delbrück提出,DNA是通过一系列的打断和重新聚合来进行的。DNA主链被打断成短片段,DNA复制发生在短片段上,在重新聚合前,这一短片段可能只有10个核苷酸大小。这种模型被称为分散复制。复制的结果是新DNA和旧DNA的混合物,每条链都是新DNA和旧DNA的混合,而不必解开DNA双链。图6-6B,在分散复制模型中,每代子链DNA都将包含母本DNA链和新合成的DNA片段。
然而,第三个阵营提出DNA复制是全保留的观点:母本DNA双螺旋将在复制后以某种方式保持完整,子代分子包含两条全新的DNA链。如图6-6C。
为了判断着三种模型哪种是正确的,Meselson和Stahl做了一个实验来展现新合成的DNA链的组成。Meselson很严肃的考虑了辨别旧蛋白和新蛋白间不同的方法,这种方法可能也可用于研究DNA。他与Stahi共同合作完成了这个实验,这个实验被称为生物学中最漂亮的实验。
他们通过培养两批大肠杆菌来开始实验,一批是用含15N氮源的培养基培养,另一批是用含14N氮源的培养基培养,培养基养分中的氮经过核苷酸合成进入核苷酸碱基,以这种方法进入生物体的DNA中。在这两种培养基中培养选拔数代后,研究者把细菌分别放入两个烧瓶中,一个的DNA含15N,而另一个的DNA含有14N。然后,Meselson和Stahl把细菌细胞打碎,把DNA装入含有高浓度氯化铯的离心管中,进行离心,氯化铯会形成一个浓度梯度,DNA分子在溶液中漂浮或下沉,平衡时,DNA分子位于周围盐浓度与它们的浮力浓度相同的位置。Meselson和Stahl发现他们能通过观察DNA在氯化铯梯度中的位置来区分含15N的DNA和含14N的DNA,因为含15N的DNA比含14N的DNA分子质量大,它们集中在接近离心管底部的位置。图6-7,氯化铯浓度梯度离心能使含15N的DNA和含14N的DNA分开细菌在分别含14N和15N的培养基中培养几代,DNA被分别标记,然后打碎细胞,把DNA装入含氯化铯盐溶液的离心管中,高速离心两天后,含15N的DNA和含14N的DNA集中在离心管的不同部位而区分开。
Meselson和Stahl一经建立了区分含15N的DNA和含14N方法,就开始着手测验关于DNA复制的各种假说。他们先在含15N的培养基中培养细菌,然后,将15N标记的细菌转移到含14N的培养基中培养。在实验开始时,所有DNA都用15N标记的,但随着细菌的分裂,新合成的DNA链是用14N标记的。然后,他们记录含14N的DNA的积累量,检测哪种假说最符合实验数据。经培养一代后,研究者发现母本的这些含15N的DNA消失了,而出现了一种密度介于15N-DNA和14N-DNA的新的DNA分子。图6-8,Meselson和Stahl实验的第一部分,排除了全保留复制模型。A,细菌在含14N的培养基中培养,离心后DNA分子位于离心管上方。B,在含15N的培养基中生长的细菌,离心后DNA分子位于离心管底部。C,把在含15N的培养基上培养的细菌转移到含14N的培养基中培养,离心后,产生一条介于两母本DNA间的带。这一实验结果可以排除全保留复制模型,但不能区分半保留复制和分散复制。因为全保留复制模型预测母本DNA将全为含15N的,而子代DNA含的氮将全为14N,半保留复制预测子代DNA将包含一条含15N的DNA链和一条含14N的DNA链,分散复制预测新合成的子代DNA是含15N的DNA和含14N的DNA的杂合分子,所以不能区分半保留复制和分散复制。
为了区分半保留复制和分散复制模型,Meselson和Stahl使DNA受到高温,而使两条DNA链间的氢键断开,使双螺旋结构被拆开而成为单链。当研究者在离心前对杂合分子加热后,他们发现DNA的一条链是含15N的,而另一条是含14N的,这进一步支持了半保留复制模型。如果分散复制模型是正确的话,每条子链都包含15N和14N,离心后,所有的DNA都将集中在中间浓度处。
这个实验也说明了Watson和Crick是正确的。事实上,这个结果被广泛而快速的接受,以至于在Meselson和Stahl发表这些数据前,教科书上就已经描述了这个实验。
二、DNA合成在复制起点开始
DNA双螺旋在正常情况下是非常稳定的:DNA的两股链通过碱基间大量的氢键牢固地结合在一起。只有提供充足的热能,才能使DNA链分开。为了用来作为复制的模板,首先要把双螺旋结构打开,两股DNA链打开,暴露出未配对的碱基。
DNA复制的过程通过最初结合到DNA上的初始蛋白结合到DNA上开始,撬开两条链,打开碱基间的氢键。图6-5,DNA双螺旋结构在复制起点处打开。复制的初始蛋白在复制起点处识别DNA序列。在局部打开双螺旋的两股链,暴露出单链来作为复制的模板。
虽然这些氢键共同地使DNA双螺旋变得非常稳定,但单独的一个氢键是比较弱的。一次使一段短的DNA链中的少数碱基对分开,不需要大量能量,在一些蛋白帮助下,在正常温度下就可以发生。
DNA首先被打开的地方被称作复制起点,它们通常有一段特点的核苷酸序列。在细菌、酵母菌这些简单的细胞中,复制起点大约包含100个核苷酸对;它们由用来吸引初始蛋白的DNA序列组成,而对于已经打开的链,DNA的延伸是很容易进行的。通过学习第五章,我们知道,A=T碱基对间形成两个氢键,G≡C碱基对见形成三个氢键,因此,富含A-T碱基对的DNA相对地比较容易分开,而且,A-T碱基对丰富的DNA序列通常位于复制起点。
一个细菌的基因组,通常包含在一个含有几百万个核苷酸对的环形DNA分子上,有一个单一的复制起点,人类的基因组,非常大,有大约10000个复制起点。在人类中,可以同时在许多地方开始DNA的复制,这样一个细胞在很短的时间内就能够复制它整个的基因组。
一旦一个初始的蛋白结合到DNA的复制起点上,复制起点处打开双螺旋结构,它就会吸引一群用于DNA复制的蛋白质。这些蛋白质组成一个蛋白机器,每一个蛋白都执行着特定的功能。
三、新DNA的合成发生在复制叉处
DNA复制过程中,包含一个Y形的接合点,我们称为复制叉。图6-9,在真核生物的染色体上在多复制起点外以相反的方向移开。这个电子显微镜照片显示了苍蝇早期胚胎的DNA复制。沿着DNA的这些课件的微粒是核小体,它们是由DNA缠绕蛋白质复合物而形成的。图1、2和3显示的是同一部分DNA分子,它们处在DNA复制的连续阶段。橙色的线代表亲本的DNA链,红的的代表新合成的DNA。
在这些复制叉处,复制机器沿着DNA链移动,打开双螺旋结构的两股链,每条链都作为模板合成新的子链。在每个复制起点外形成两个复制叉,它们从复制起点开始沿相反的方向移动,随着复制的移动,DNA双螺旋被打开。所以,把在细菌和真核生物染色体中的DNA复制称为双向复制。复制叉移动的非常快—在细菌中大约每秒1000个核苷酸对,在人类中,大约每秒100个核苷酸对。在人类(可以说在所有真核生物中)复制叉移动的速度比较慢,这可能是由于这些生物体中,DNA是通过更复杂的染色质来复制的。
DNA复制机器的核心是一种被称为DNA聚合酶的酶。这种酶用亲本DNA的一条链作为模板来合成新的DNA。这种酶催化DNA链的延长,通过正延长的这条DNA链的3’末端与新加入的核苷酸的5’磷酸基形成一个磷酸二酯键而使DNA链继续延长。
DNA合成的基本反应是:一个脱氧核糖核苷酸与一条多聚核苷酸链的3’-OH末端结合。所以新的DNA链的合成方向是5’→3’。核苷酸是以核苷三磷酸的形式参与反应,即将进入的这个脱氧核糖核苷酸和模板链间的碱基对配对,指导者在核苷酸序列上与模板链互补的新DNA链的形成。如图6-2。
DNA聚合酶催化话核苷酸结合到正延长的DNA链的3’-OH游离端。新进的这个核苷三磷酸断裂一个酸酐键(星号)释放大量的自由能。这些能量用于这个聚合反应。
在核苷三磷酸中,一个高能建的水解,使核苷酸单体连接到DNA链上,并释放一分子焦磷酸盐。DNA聚合酶把能量的释放和聚合反应连接起来。而焦磷酸盐进一步水解为无机磷酸,使聚合反应不可逆。
DNA聚合酶在每次增加一个新核苷酸到正延长的DNA链上后并不从DNA上分离下来,而是一直与DNA结合,沿着模板链逐步的移动,催化进行聚合反应。
第五篇:复制思维
复制思维
喜欢在行走的路上随意哼些荒诞的音调,连同舌尖的字符,那一定会是一生最美妙的曲调;
喜欢在静默中把心中的画面拼凑起来,组成一副一副蒙太奇的画面,连接起来,那一定会是人生最美好的景象;
喜欢在晨日中回味昨夜还记得的梦境,或惊险或离奇,记录下来,那一定会是人生最伟大的书籍。
这些或许不值一提的想法某日在一个着名电影导演的话中得到证实:每个人把心中的景象拍成一部电影,那它一定是一部伟大的电影。就这样,把胡乱的思绪组合起来,发现世间还真有不少东西仅因为“复制思维”就能变得伟大的细小的事物,而我原本的想法也在别人口中得到证实给我更多勇气说出这样的想法。
复制思维,把人生的喜怒唉乐用音乐图象书籍这三种方式记录下来,留给自己和子孙一部最伟大的着作,给后人千千万万座宝藏,在过去中寻求更多力量走在前行的路上。婉若昨夜的梦,如今还记忆尤新,那暝暝中注定的结局在历史背景下结束又同样以一本书来告终,简直可以拍一部电影,写成一部小说也是绰绰有余。那时拍摄和写作的水平就会秃显出来,要是没有一定能力的呢?那他也就不能让世人知道那瞬时的想法,这样也太不公平了,要是可以“复制思维”每个人都可以留住自己的精彩,那时每个人都是导演每个人都是作家,可这也不会使导演和作家等职业从人们的生活中消失,反而人们以更加挑剔的眼光来看世人的作品,而那些活得精彩的人则也会成为在这种形式下的相关职业工作者。人们心理交流也就更加丰富,也在一定程度上挽回了现代社会人冷漠的一面。而这些又给狗仔更加安全的得到消息而艺人也不会因为偷拍而烦恼,人们也就能了解更多细小的生活。当然这一切都要建立在本人同意复制并发表的情况下。
当然这需要先进的技术支持,我设想像蜘蛛侠2里面的章鱼博士脊髓上的芯片一样,只要人想控制只需要比如ctrl+c这样简单的按钮就行,这样简单方便,等复制完后再接上特殊的设备,就能把思维转化成文字或者其他更多的形式。
我坚信这种假设会在将来的某一天实现,可能我见不到这一天,可给后人提供更加丰富的生活也不错,生命在于创造,记住这是我说的,不是生命在于运动,OK?