第一篇：四川大学生物制药技术复习资料
生物制药技术复习资料
一、生物药物生产原料选择的主要原则。生物药物的特性及种类。
主要原则：有效成分含量高，原料新鲜；来源丰富，易得；原料产地较近；杂技含量少；原料成本低；易提取。特性：（1）药理学特性：治疗的针对性强；药理学活性高；毒副作用小，营养价值高；生理副作用常有发生。（2）生产、制备中的特殊性：原料中的有效物质含量低；稳定性差；易腐败；注射用药有特殊要求。（3）检验上的特殊性：要有理化检验指标，和生物活性检验指标。分类：
按药物化学本质和化学特性分类：（1）氨基酸及基衍生物类（2）多肽和蛋白质类（3）酶和辅酶类（4）核酸及基降解物和衍生物类（5）糖类（6）脂类（7）细胞生长因子类（8）生物制品类（9）小动物制剂（10）动物器官或组织制剂
按原料来源分类：（1）人体组织（2）动物组织（3）植物组织（4）微生物（5）海洋生物来源的药物
按生理功能和用途分类：（1）治疗药物（2）预防药物（3）诊断药物（4）其他
二、生物药物提取分离制备方法的工艺过程。在对生物药物进行提取操作时，选择提取试剂需注意的问题。
工艺流程：
1、生物药物原料的选择、预处理与保存
2、生物药物的提取：（1）生物组织与细胞破碎：磨切法，压力法，反复冻融法，超声波震荡破碎法，自溶法，酶溶法（2）选择合适的溶剂进行提取
3、生物药物的分享纯化：（1）蛋白质类药物的分享纯化：沉淀法，亲和层析法，疏水层析法（2）核酸类药物的分离纯化：提取法，发酵法（3）糖类：沉淀法，离子交换层析法（4）脂类：沉淀法，吸附层析法，离子交换层析法（5）氨基酸类：沉淀法，吸附法，离子交换法
试剂的选择：
1、对所需要提取的活性成分溶出度较高，对杂技较低。
2、不破坏活性成分。
3、利于后续预处理。
4、对环境影响较小，有利于回收和处理。
5、对设备要求不高。
6、成本较低。
7、对人体无害
三、基因工程制药的主要工艺过程
获得目的基因，组建重组质粒，构建基因工程菌（或细胞），培养工程菌，产物的分离纯化，质量控制，产品检验包装
四、目的基因及其获取方法和要求，构建cDNA文库法分离目的基因主要步骤。
获取方法：构建基因文库法，构建cDNA文库法，DNA的化学合成法，PCR法，反转录法 要求：不含多余干扰成分，纯度高，片段大小适合重组操作
主要步骤：选择分享表达目的基因的组织或细胞，制备总体RNA和mRNA-cDNA第一链和第二链的酶促合成和分级分离，与各种接头连接并克隆到载体，包装及转染宿主菌，在培养基上生长繁殖成重组菌落或噬菌斑，筛选出含有目的基因的克隆，cDNA文库的质量检测及保存
五、基因工程菌的培养方式，连续式发酵对基因工程产品大规模生产的优势。影响基因工程菌发酵的主要因素有哪些？如何进行基因工程菌发酵条件的研究。
培养方式：分批培养，补料分批培养，连续培养，透析培养，固定化培养
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连续培养优势：
1、可为微生物提供恒定的生长环境，控制其比生长速率，2、可实现将工程菌的生长阶段和基因表达阶段分开进行两阶段连续培养，并可通过优化速率水平，稀释率和比生长速率这三个参数，保证在第一阶段培养时质粒稳定，在第二阶段获得最高表达水平或最大产率。
影响基因工程菌发酵的主要因素：
1、培养基的影响。
2、接种量的影响。
3、温度的影响。
4、溶解氧的影响。
5、诱导时机的影响。
6、诱导表达程序的影响。
7、pH的影响
研究内容：
1、选择宿主菌：研究不同宿主菌对外源基因表达的影响
2、基因工程菌的生长曲线测定3发酵条件对外源基因表达的影响
4、重组质粒稳定性研究
六、以包涵体表达形式的基因工程药物的分离纯化过程和方法，分离纯化出具有活性的蛋白质的一般步骤及其操作要点。如何进行分离纯化的研究。过程方法及操作要点：
1、菌体细胞的收集与破碎（既要使菌体破碎率尽可能高，又要保持包涵体的完整性）
2、包涵体的分离，洗涤与溶解（通过离心法使包涵体与上清液中的碎片及杂质蛋白分开。包涵体的洗涤基本原则：杂质去除率尽可能高而不溶解包涵体中的目的蛋白。溶解包涵体的试剂选择基本原则：（1）对目的蛋白的溶解性强，选择性好，（2）保护蛋白质的生物活性（3）安全性（4）适合后续各种纯化操作（5）价廉）
3、变性蛋白的纯化（对包涵体抽提物采用柱层析、凝胶过滤、离子交换层析和HPLC等方法进一步分离纯化）
4、蛋白质的复性（恢复可溶性和生物活性，就考虑影响因素：蛋白质尝试，杂质含量，重折叠速度，氧化还原剂用量和比例，重折叠配体的掺入，温度，pH和离子强度等）分离纯化研究：
1、破菌研究：破菌方法及其条件研究，镜检评价其破碎效果，原则是使菌体破碎率尽可能高，又要保持包涵体的完整性
2、包涵体的分离和洗涤研究：（1）分离包涵体时的离心力和时间的考察，（2）洗涤剂及其他浓度，用量研究（3）洗涤时间和温度研究
3、目的蛋白的变性（抽提）研究：（1）变性剂及其浓度、用量的研究（2）变性操作时间和温度研究（3）变性操作后的固液分离研究。
4、变性蛋白的纯化研究：对包涵体抽提物可采取柱层析，凝胶过滤，离子交换层析和HPLC等方法进一步分离纯化。
5、变性蛋白的复必研究：考察比较不同复性方法对目的蛋白复性效果的影响。
6、目的蛋白的高度纯化研究：对经复性后得到的目的蛋白进行进一步高度纯化，以满足不同的需要。
七、基因工程药物质量控制的必要性及其质控要点，基因工程药物最终产品的质量控制特点及要点。必要性：
1、它是利用获得细胞作为表达系统来制备产品，所获得的蛋白质往往分子量较大，并且具复杂的表达结构
2、许多基因工程药物都是参与人休一些生理功能精密的蛋白质，在极微量的差别的情况下产生显著效应
3、宿主细胞中表达的外源基因在翻译，转录及工艺放大的过程中会产生变化、质控要点：
1、原料的质量控制。
2、生产的质量控制。
3、最终产品的质量控制
质控特点：任何单一的分析方法都无法满足对该类产品的检测要求，它需要综合生物化学，2 / 5
免疫学，微生物学，细胞生物学和分子生物学等多门学科的理论和技术，才能切实保证基因工程产品的安全有效。
八、目的基因高效率表达的方式，全面提高目的基因表达水平的措施和方法。表达方式：
1、目的基因的不溶性高效表达：包涵体形式。
2、目的基因的可溶性高效表达：直接得到有生物活性的目的蛋白；
3、目的基因的高效分泌表达： 措施：
提高目的基因表达水平的措施(上游阶段)1.对基因工程宿主菌进行改造。2.选择能高密度表达的宿主菌。3.选择能提高目的蛋白表达质量的宿主菌
提高目的基因表达水平的措施(下游阶段)1.提高工程菌的质粒稳定性。2.对重组菌进行高密度培养。3.减少乙酸等抑制性副产物的形成。4.选择能提高目的蛋白表达质量的方法
九、酶工程制药的主要内容
1、药用酶的生产：发酵生产，分离纯化，分子修饰
2、酶法制药：酶催化反应、固定化、非水相催化
十、酶法制药研究中涉及到的研究项目及内容
1、原料的选择及反应的研究。
2、酶或酶系的选择研究。
3、酶催化反应最佳工艺条件研究。
4、产物的分离纯化研究
十一、植物细胞的生理特性，植物细胞培养的基本流程和技术。生理特性：
1、比微生物细胞大得多；
2、具有群体生长特性，单细胞难以生长，繁殖；
3、对剪切力敏感，抗张力强度大，抗剪切力小；
4、生长速度慢，操作周期长；
5、容易结成细胞团；
6、大多植物细胞的生长及次级代谢物的生产都要求一定的光照和时间，且不同波长的光具有不同的效果
基本流程：
1、外植体的获得及预处理；
2、获得悬浮细胞株
3、悬浮细胞株筛选
4、植物细胞的扩大培养；
5、大规模培养 基本技术：
1、植物细胞的获得技术；
2、植物细胞的选育与改良技术；
3、植物细胞培养技术；
4、植物细胞培养次级代谢产物技术；
5、植物细胞培养生物转化技术
十二、植物细胞获取的主要方法及其操作过程
主要方法：从外植体直接分离，组织诱导获取，原生质体再生 操作过程：
1、外植体的选择与预处理
2、直接分离：（1）机械捣碎法：先将外植体轻轻捣碎，然后通过过滤和离心分离细胞（2）酶解法：利用果胶酶，纤维素酶等处理，分离出具有代谢活性的细胞
3、愈伤组织诱导法：（1）诱导培养基的制备（2）外植体植入诱导培养基中培养生成愈伤组织（3）愈伤组织继代培养
十三、植物细胞培养中提高植物次生代谢物生产的途径。
1、添加诱导因子；
2、前体饲喂：在植物细胞培养中加入次生代谢物合成的前体物质；
3、两相法培养；
4、培养条件的控制；
5、在培养基中添加代谢产物合成抵制剂；
6、其他，如选育高产细胞株，二步法培养，新型生物反应器等
十四、植物细胞培养制药的培养方法。愈伤组织培养的基本过程和操作
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培养方法：
按培养对象分：愈伤组织培养，原生质体培养，小细胞团培养 按培养基类型分：固体培养，液体培养
按培养方式：悬浮细胞培养，固定化细胞培养 基本操作和过程：
1、愈伤组织培养基的配制；
2、愈伤组织的选择；
3、接种；
4、培养
十五、植物细胞培养次级代谢物生产的基本工艺过程，如何对植物细胞培养次级代谢物生产制药及植物细胞培养生物转化制药进行研究 工艺过程：
1、外植体的选择与处理；
2、植物细胞的获得；
3、植物细胞的扩大培养；
4、植物细胞悬浮培养；
5、次级代谢物的分离纯化 研究的内容：
1、外植体的选择和处理研究；
2、愈伤组织诱导；
3、植物细胞的诱变、筛选；
4、细胞悬浮培养的研究；
5、提取分离与纯化方法研究
十六、动物细胞的生理特点，生产用动物细胞的种类及其特点，工程细胞库的种类及要求，细胞的冷冻保存与复苏技术及其操作要领
生理特点：
1、动物细胞的分裂周期长；
2、细胞生长需贴附于基质，并有接触抑制现象；
3、正常二倍体细胞的生长寿命有限；
4、对环境敏感；
5、对培养基要求高；
6、蛋白质的合成途径和修饰功能与细菌不同 细胞种类及特点：
1、原代细胞：增殖能力有限，需大量动物
2、二倍体细胞体：传代寿命有限，具有明显的贴壁依赖和接触抑制特点，无致癌性
3、转化细胞系：具有无限繁殖超额能力，倍增时间较短，对培养条件和生长因子要求较低
4、融合细胞系：杂交特性
5、重组工程细胞系
工程细胞库的种类及要求：
1、原始细胞库（MCB）:储存于MCB的细胞应该是单一来源的均质细胞，对二倍体细胞应该是群体倍增水平尽可能低的细胞。储存时需有该细胞的详细档案，包括该细胞系的历史，我和对各种有害因子的检查结果
2、生产用细胞（MWCB）储存于MWCB的细胞应该是从MCB来的，或从单一安瓿来，或从多个安瓿在融化即刻混合在一起的然后经培养扩增达一定数量后，再分装储存形成的细胞库。该细胞库同样需要建档案，而且需进行无菌性的无细胞交叉污染的检查 细胞的冷冻保存与复苏技术及其操作要领：
常用技术是液氮冷冻保存法，主要采用加入适量保护剂的缓慢冷冻法保存细胞。步骤：细胞悬液制备，加保护剂，分装和封口，液氮冻存。
复苏一般采用快速融化法，以保证细胞外结晶快速融化，以避免慢速融化水分渗入细胞内，再次形成胞内结晶损伤细胞。
十七、动物细胞体外培养的生长与增殖过程，动物细胞与微生物细胞和植物细胞在培养上的区别，动物细胞培养的方法和操作方式及其特点 生长与增殖过程：原代培养期，传代培养期，衰退期
培养区别：
1、动物细胞无细胞壁，且大多哺乳动物细胞附着在固体或半固体的表面才能生长
2、对营养要求严格，除氨基酸，维生素，盐类，葡萄糖或半乳糖外，还需要血清
3、动物细胞对环境敏感，包括pH，溶氧，温度，剪切应力都比微生物有更晋严的要求，4 / 5
培养方法及特点：
1、悬浮培养：适用于一切各类的悬浮细胞和兼性贴壁细胞。优点：操作简便，培养条件较均一，传质和传氧较好，容易扩大规模培养。缺点：较难采用灌流培养，细胞密度一般较低
2、贴壁培养：适用于一切贴壁细胞和兼性贴壁细胞。优点：适用的细胞各类广，较易采用灌流培养，细胞密度高，缺点：操作比较麻烦，需要合适的贴附材料和足够的面积，培养条件不均一，传质和传氧较差。
3、贴壁－悬浮培养：将悬浮培养和贴壁培养两者结合，优势互补，主要方法有：微载体培养，包埋和微囊培养，结团培养。操作方法及特点：
1、分批式操作：细胞和培养基一次性加入反应器进行培养
2、流加式操作：不断加入营养成分而不取出条件培养基
3、半连续式操作：每隔一段时间取出部分培养物，补充同样数量新鲜培养基
4、连续式操作：连续地加入新鲜培养基，同时等速地取出反应器内的培养液（包括细胞）
5、灌流式操作：不断取出部分条件培养基（无细胞），补充等量新鲜培养基
十八、动物细胞培养制药的基本工艺过程。目前用哺乳动物细胞大规模培养生产蛋白工业化过程的主要通用技术平台及其特点
动物细胞－捣碎－组织碎片－酶处理－单个细胞－离心收集细胞－营养培养－培养瓶培养－消化处理－接种－扩大培养－种子细胞液氮保存－取出细胞种子－种子解冻复活培养－扩大培养－接种－大规模培养－产物分离纯化－产品 技术平台及特点：
主要是以搅拌式生物反应器悬浮培养（70％以上）作为通用技术平台,平台工艺的特点是采用无血清培养（50％以上）和成熟的流加和灌流工艺。
悬浮培养工艺中影响细胞生产数量和质量的因素,主要应考虑细胞培养环境(营养条件、产物积累、pH、温度和渗透压),终产物(乳酸和氨)毒性累积和必需营养物的添加等。设计适应细胞生长的无血清培养基,控制营养物的添加,减少产物消耗积累是解决问题的有效手段。对于搅拌的剪切损害可通过反应器的优化被减少, 另外在培养液中添加剪切保护剂。贴壁细胞生产工艺,最佳的生物反应器形式是搅拌式微载体悬浮培养系统,并可提供最有效的优化工艺和最适宜的流加工艺设计。最佳的工艺设计是高密度连续灌流培养。流加培养和灌流培养是动物细胞培养工艺中最常用的两种操作方式
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第二篇：生物制药技术
08药学***3陈省委
组合生物合成药物进展
摘 要50年来抗生素在人类疾病治疗中发挥了重要作用,今后的几十年里它们也将是关键的治疗剂。尽管在过去的20年中通过靶向筛选发现了一些微生物药物,但是这种筛选方法很难发现新类型药物。组合生物合成可以弥补这种不足,通过基因工程方法改造微生物基因和酶,产生新的抗生素,发现那些在自然界中不能发现的药物。
关键词 基因工程合生物合成新抗生素
微生物种类繁多,其产物化学结构丰富多彩,生物活性十分广泛,是开发各种新产品的丰富资源,但是传统的筛选方法已远远不能满足社会发展的需要。随着分子生物学和生物技术的发展,以及基因组学、蛋白质组学、生物信息组学、代谢组学研究的深入,人们对微生物基因组的研究也有了显著进展,已经阐明了许多与微生物代谢有关的生物合成基因,为微生物组合生物合成药物的研究和开发奠定了良好的基础。
一、研究背景
自1928年弗莱明发现青霉素和1942年瓦克斯曼发现链霉素以来,微生物药物在疾病防治和拯救人类生命中起着十分重要和不可替代的作用,特别是抗生素被国外科学家誉为20世纪医学领域的皇冠宝石。微生物药物一直是临床最常用的药物,在西方发达国家,抗生素占临床处方药物的20%以上,在中国约占处方药物的30%。但自上世纪70年代后,随着脊髓灰质炎、天花、麻风等传染性疾病先后在全球范围内被消灭,国家对微生物药物研究的支持逐渐下降,抗传染病药物研究进入了困难时期。上世纪90年代后,我国在已有亿乙肝病毒携带者的基础上,又出现了100万以上人类免疫缺陷病毒(HIV)携带者。2002年末以来,重急性呼吸窘迫综合征(SARS)的出现使我国的传病控制告急,不得不重新思考微生物药物的研究策略在新的时期里,微生物药物研究再度升温,原因
①新病原微生物不断出现,如SARS、艾滋病(AIDS)疯牛病等;②生物武器的使用,如炭疽等;③各种耐菌株在世界范围的传播;④许多传染性疾病,如肺核、血吸虫病等的死灰复燃。目前国内外侧重研究的生物药物,主要有抗新病原微生物,抗耐药菌,抗病毒,抗肿瘤抗生素以及微生物来源的生理活性物质。微物药物的研究主要
包括以下内容:①抗新病原微生药物的寻找与开发;②细菌耐药机制及其抗耐药细药物研究;③微生物药物的生物合成基因研究;④组生物合成微生物药物研究。其中组合生物合成微生药物是近年发展较快的研究领域,将在创新药物研中发挥重要作用。
二、组合生物合成生物技术,尤其是基因工程技术的不断发展,为生物医药领域开辟了广阔的前景;通过基因工程技术所得到的药物也在临床治疗某些疑难疾病中发挥着越来越重要的作用。
广义,基因工程产品分为两类
①单基因直接产物。通常是指单个基因编码序列的翻译产物(蛋白质),它们一般是生物大分子如干扰素和单克隆抗体,目前生物医药领域中开发的多数产品均属于此类,其中包含有效地用于临床治疗的如重组人胰岛素、干扰素和促红细胞生成素。我国在此领域独创的药物不多,而且这类药物的一个突出缺点是它们比较容易被仿制,只要有了相应的细胞系即可利用基本设备进行生产。
②多基因间接产物。是指由多基因编码的多酶体系介导而合成的小分子化合物和多肽,包括自然界由微生物和植物产生的天然产物,如抗生素、生理活性物质或萜类化合物等结构比较复杂的化合物。它们品种繁多,性能各异,仅就目前研究得比较深入的聚酮体和萜类化合物,就包括具有抗肿瘤作用的阿霉素、紫杉醇,具有免疫抑制作用的FK506、西莫罗司,具有降血酯作用的洛伐他汀、银杏内酯,具有抗结核杆菌作用的利福霉素,抗疟药物青蒿素等。
组合生物合成(combinatorial biosynthesis)是在微生物次级代谢产物合成基因和酶学研究基础上形成的。组合生物合成的概念是结构不同但生物合成途径相似的抗生素生物合成基因之间可以进行重组、组合或互补产生新结构的化合物。尽管微生物药物的结构多样,但形成这些产物的主要生化反应机制却基本相同,它们通常是由非常简单的化学物质,如小分子羧酸和某些氨基酸作为合成起始单位和延伸单位,通过由一系列基因编码的多酶体系参与的生物化学反应(构成一个合成途径)而形成的,参与这些天然产物生物合成的多酶体系是由多个结构明显分开的功能区域所组成。研究表明,参与这类小分子生物合成的基因通常是连锁或邻接而构成一个基因簇(cluster),这为基因的克隆和操作提供了方便,同时由于参与
次级代谢生物合成酶系对底物的特异性,专一性要求不是很严格的,对结构相类似的底物均可识别,这一特点为不同基因组合产生新的化合物创造了条件。因此,有针对性地对某些基因进行操作,如替换、阻断、重组以及添加、减少组件等,均有可能改变其生物合成途径而产生新的代谢旁路(metabolic pathway),继而形成新的化合物,这就为组合生物合成提供了基础,国际上已有通过这些手段得到多个化合物的报道。
三、研究的科学意义
开展微生物基因工程组合生物合成创制新型药物研究,具有如下意义。
1、利用组合生物合成体系,完成化学方法不能完或难以完成的活性化合物的合成,如抗癌药物紫杉(taxol)等;这类活性化合物在自然界中含量少、需要大、医学价值高,而且通常化学合成困难(成本高,难大,环境污染严重),为了确保红豆杉资源的可持续用,除正在开展的苗圃栽培,并以苗圃作为紫杉醇提的原料之外,通过生物合成来使它们具最终的商业值是一个极具潜力的手段。例如,与抗癌药物紫杉醇用相似的埃波霉素(epothilone)已在链霉菌中通过合生物合成方法获得表达,现已进入开发研究阶段。、对一些现有的结构复杂的天然产物如青蒿素银杏内酯等有效组分进行定向合成,对临床用抗生品种进行有针对性的修饰和改造,如对红霉素进行造产生酮内酯型的大环内酯类抗生素,获得对临床药菌具有活性的抗生素衍生物;或者通过对现有天产物或抗生素的结构改造,获得具有全新活性的或化性能有明显改善的天然产物或新抗生素。、组合生物合成产生新化合物的潜力很大,化合数是以可操作基因的指数方式形成,如设R为可利的基因数,n是每个基因的不同等位形式(即不同天产物来源的数目),从理论上讲经过基因组合可得Rn种排列组合,即得到Rn个化合物。通过组合生合成,获得一大批新化合物,作为高通量药物筛选样库的来源之一。、由于多基因组合操作的平台是以易于大规模产的微生物体系为基础,使创制新型药物的研究便产业化。、组合生物合成的研究,必将推动我国在基因水对天然资源的利用,更好地利用植物代谢产物,挖掘前实验室条件下无法进行培养的生物体,包括海洋的生物体。随着研究和应用的发展,植物和海洋生物级代谢产物的组合生物学研究,也将蓬勃
发展起来。
四、国内外研究现状
1985年,Hopwood教授[4]在世界首次报道用遗工程的手段合成“非天然”的天然产物isochromanequinone,该工作为后来的组合生物合成奠定了础。在以后的十几年里,这一领域成为天然产物代工程研究中最活跃的领域,许多微生物次级代谢研的专家都加入这一领域的工作,因为组合生物合成潜力制造出很多先导化合物。目前的发展趋势由最初的基础研究逐步演变为基础与应用兼顾,有的地向产业化迈进。该领域的研究也同样得到工界的重视,美国加州高新技术产业公司研制的埃波素(epothilone D)已进入III期临床评价阶段。埃霉素原来由纤维堆囊黏细菌产生,其产量低,繁殖时间长,产品无法进行产业化生产。该公司利用基因组合技术使纤维堆囊黏细菌的埃波霉素生物合成基因在链霉菌中得到表达,并通过酰基转移酶域替换及羟基化酶基因的阻断,获得了主要产生埃波霉素中抗肿瘤活性最好组分的epothilone D的基因工程菌。我国自上世纪80年代初开展以多基因组合工程技术研制新药的研究,在聚酮类抗生素如大环内酯类抗生素、利福霉素、安莎霉素及抗生素产生菌分子生物学研究方面,取得一定进展。国家重大专项支持的基因工程必特螺旋霉素己进入临床研究,基因工程必特螺旋霉素的研制为组合生物合成技术应用于小分子化合物的创制中提供了良好的工作基础和经验。我国微生物代谢产品研究历史悠久,已形成多学科协调合作的体系,近年来在国家的支持下该体系已得到一定的发展,加强了微生物及代谢产物资源的开发。我们已逐步建立难培养极端微生物和未培养微生物资源及海洋微生物的挖掘工作,建立并完善从土壤或其他来源直接分离DNA技术。我国有很强的有机化学合成能力,可以合成进行组合合成的起始单元,开展前体介导的组合生物合成(precursor-directed biosynthesis)研究。我们已建立并不断完善多种生物活性筛选模型,有天然产物化学分离鉴定及药理、药效、毒理评估的配套学科。
目前基因工程技术的发展水平,在单基因操作方面已经比较成熟;在多基因操作层次上虽然技术难度相对比较大,但近年来在此研究领域已有了迅猛的发展,已积累了较好的研究基础,许多次级代谢产物生物合成基因簇已得到克隆,基因结构与功能已得到阐明,并且发展了一系列大容量载体和合适的宿主表达系统。组合生物合成已形成国际药物领域研究的热点和一个重要发展方向。
五、研究方向与前景
我国天然微生物及植物资源丰富,以微生物作为平台的药物生产历史悠久、种类繁多,利用这一宝库开展组合生物合成研究,建立新型化合物库,作为新型药物或先导化合物的重要来源之一,有重要的理论与实际意义。组合生物合成为当今世界研究热点,我国也有一定工作基础,开展这方面的研究将有利于加深对次级代谢生物合成机理的研究与应用、促进生物技术新药研制中的作用,对发展我国新药有重要意义,并推动新药研究中高通量筛选技术与方法的建立与善,筛选出有价值的新药。
我们要重点加强难培养微生物及海洋生物资源挖掘工作,建立并完善从土壤或其他来源直接分DNA技术,以丰富组合生物合成基因资源;加强微物天然化学研究,建立微量、快速、高效鉴定天然产化学结构的技术和方法;充分利用我们已经建立的种生物活性筛选模型,通过广泛地联合与协作,扩展合生物合成技术在创新药物中的应用,建立我国基工程微生物组合生物合成创制新型药物或先导化合研究的技术平台。该研究将有助于开拓和促进我国新技术在新药研究与开发中的应用,对创制具有我自主知识产权的新药将会有积极推动作用。
对本课程的意见：
1、可能是因为选课人太少的问题，上课的时候没有很好的听课气氛，不过主要
还可能是自己的原因，自己不能集中精神听讲。
2、以后只要选课的人比较多了，应该会好一些，上课的人少了，总是觉得就像
这门课不重要，老师讲的很清晰，主要是我们上课时常开小差。自从上了大学，就没太有人管了，有时听起课来就爱听不听，这倒是对每门课都差不多的。
3、课堂上可以稍微提问一下，因为提问往往可以引起同学们的注意，这样走神的情况可能会少一些。
4、课堂中还可以穿插一些与课程有关的历史、说一下那些地方比较适合做研究、考研究生去哪里比较好啊什么的，这样既可以对现在的科研大环境有所了解，课堂内容也不至于太单调。
最后谢谢老师兢兢业业地为我们把课上完，尽管上课人数少，你还是把课完整地给我们讲完，谢谢老师为我们的付出。
第三篇：生物制药技术
酶
分离纯化酶的一般程序
1粗酶液的制备：材料的选择，发酵液处理，细胞破碎及酶的抽提 2酶的初步分离：盐析，等电点沉淀，有机溶剂沉淀，离心分离 3酶的高度纯化（酶的精制）：层析法（凝胶过滤、离子交换层析、吸附层析及亲和层析），电泳（等电聚焦电泳）
4浓缩干燥及结晶：透析，旋转蒸发，超滤，冷冻干燥
酶的主要纯化技术－层析技术
利用混合液中各组分的物理化学性质的不同，(分子的大小和形状、分子极性、吸附力、分子亲和力、分配系数)，使各组分以不同的比例分布在两相中，当流动相以一定的速度流经固定相时，各组分的移动速度不同，从而使不同的组分分离的技术过程。称为层析技术（chromatography）
离子交换层析（ion exchange chromatography）
在一定的pH条件下，带电荷的蛋白质与高分子不溶性固定相偶联的离子交换基团相吸附，流动相中解离的离子与被吸附的酶发生可逆的交换，而对不同吸附能力的蛋白质进行分离 离子交换剂的选择：阴离子交换剂用于处理净电荷为负的蛋白质，阳离子交换剂用于处理净电荷为正的蛋白质
样品在低离子浓度条件下上柱，逐渐增加洗脱液的离子浓度，使蛋白依次被洗脱下来 洗脱方式可以是步进式洗脱或线性梯度洗脱 洗脱液一般用 NaCl
凝胶过滤法（gel filtration）亦称分子筛层析、排阻层析，是利用生物大分子的相对分子质量的差异进行层析分离的一种方法
凝胶层析的固定相是惰性的珠状凝胶颗粒，凝胶颗粒的内部具有立体网状结构，形成很多孔穴。当含有不同分子大小的组分的样品进入凝胶层析柱后，各个组分就向固定相的孔穴内扩散，组分的扩散程度取决于孔穴的大小和组分分子大小。比孔穴孔径大的分子不能扩散到孔穴内部，完全被排阻在孔外，只能在凝胶颗粒外的空间随流动相向下流动，它们经历的流程短，流动速度快，所以首先流出；而较小的分子则可以完全渗透进入凝胶颗粒内部，经历的流程长，流动速度慢，所以最后流出；
分离提纯 脱盐 测定高分子物质的相对分子量
疏水层析（hydrophobic chromatography）
原理：蛋白质分子中含有亮氨酸、缬氨酸和苯丙氨酸等疏水性较强的氨基酸，当蛋白质溶液经过疏水层析介质的疏水配基时，蛋白的疏水性集团（疏水补丁）会与疏水配基发生亲和作用而被吸附在介质上。不同蛋白质分子中疏水基团的数量和特性有所不同。在洗脱时通过改变洗脱液的极性达到分离的目的
亲和层析（affinity chromatography）
也称功能层析、生物专一吸附或选择层析。根据生物分子与特定的固相化配基（ligand）之间的亲和力而使生物分子得到分离的方法 酶与激活剂/抑制剂/底物/辅酶；抗原与抗体；激素/配体与受体；蛋白质与DNA/RNA上特定区域
特定的配基（激活剂/抑制剂/底物/辅酶）固定于惰性载体 目的酶与配基特异性亲和吸附，杂质被洗脱 改变洗脱条件，解除目的酶与配基的专一性结合
固定化酶（细胞）的定义
优点：
1.稳定性显著提高；
2.同一批固定化酶能重复多次地使用； 3.固定化后，很容易与反应物分开（过滤），不污 染产物，而且有利于控制生产过程，同时也省去了 热处理等使酶失活的步骤；
4.可长期使用，并可预测衰变的速度； 5.提供了研究酶动力学的良好模型。缺点：
①固定化时，酶活力往往有损失。②增加了生产的成本，初始投资大。
③只能用于可溶性底物，而且较适用于小分子底物，对大分子底物不适宜。④非均相反应。
①注意维持酶的催化活性及专一性。在酶的固定化过程中，酶与载体的结合部位不应当是酶的活性部位，而且要尽量避免那些可能导致酶蛋白高级结构破坏的条件。②固定化应该有利于生产自动化、连续化。为此，用于固定化的载体必须有一定的机械强度，不能因机械搅拌而破碎或脱落。
③固定化酶应有最小的空间位阻，尽可能不妨碍酶与底物的接近，以提高产品的产量。④酶与载体必须结合牢固，从而使固定化酶能回收贮藏，利于反复使用。
⑤固定化酶应有最大的稳定性，所选载体不与废物、产物或溶剂发生化学反应。⑥固定化酶成本要低，以利于工业使用。
载体结合法
1物理吸附法2离子结合法3共价结合法 是将酶结合于不溶性载体上的一种固定化方法。1）物理吸附法 作用方式：非特异性物理吸附作用：范德华力；氢键；疏水作用；静电作用 优点：制作简单，酶分子的构象很少或基本不发生变化，固定化酶活力较高 缺点：酶与载体结合力弱，酶易从载体脱落 载体：纤维素、琼脂糖、活性炭、沸石及硅胶等 2)离子结合法
作用方式：离子键结合
优点：制作简单，处理条件缓和，酶蛋白的活性中心和高级结构破坏较少，可以制得活力较高的固定化酶。
缺点：离子键结合较松散，如在高离子强度下进行反应时，酶与载体易分开。载体：多糖类离子交换剂，合成高分子离子交换树脂 3)共价键结合法
作用方式：共价键结合
优点：酶分子和载体间的共价键较牢固，有良好的稳定性及重复使用性 缺点：制备过程复杂，反应条件比较剧烈，酶活性损失比较严重。
制作方法：先将载体活化，在载体上引入一个活化基团，然后该活化基团再与酶分子表面的基团（羧基/氨基/羟基）反应结合。有戊二醛法、重氮化法、烷基化法等。
交联法
利用双功能（或多功能）基团的试剂，使酶蛋白分子之间发生交联，凝集成网状结构而成为固定化酶
常用的双功能试剂有戊二醛、己二胺、顺丁烯二酸酐和双偶氮苯等。其中最常用的是戊二醛
包埋法
1网格型2微囊型
将酶包埋在凝胶的微小空格内或埋于半透膜的微型胶束内，但底物仍能渗入到里面与酶接触。
载体：凝胶，高分子聚合物（半透膜）
优点：利用此法制得的固定化酶，由于酶分子仅仅是被包埋起来，而未受到化学作用。酶蛋白几乎不起变化。
缺点：酶被包埋在内部，对大分子底物很难发生催化作用。所以用包埋法制备的酶，一般只适用与小分子底物。
包埋法分为：网格包埋法和微囊包埋法。
酶传感器（enzyme sensor）1生物传感器的概念
由生物识别物质（如酶、微生物、动植物组织、抗体等）和能量转换器相结合所构成的分析仪器，可以简便快速的测定各种特异性很强的物质 要求识别物质对被测物具有高度的敏感性和选择性
根据识别物质可分为：酶传感器、组织传感器、微生物传感器、免疫传感器
2、生物传感器的一般结构与工作原理 结构:有两个部分组成
生物分子识别元件（感受器）：酶、核酸、抗体、细胞等 信号转换器（换能器）：电化学电极、光学检测元件、热敏电阻、表面等离子共振器件等 原理：待测物质经扩散作用进入生物传感器,通过分子识别发生特异的生物化学反应,产生的生化信号经换能器转换为可定量和可处理的电信号,进而可检测出该物质的浓度.根据反应产生的信号不同，可选择相应的换能器.抗体
多克隆抗体：由于一个抗原通常都有几个抗原决定簇，因此每个免疫细胞都可能产生一种针对某一抗原决定簇（antigenic determinant）的抗体，这些由同一抗原产生的不同抗体统称为多克隆抗体。这些由不同B细胞克隆产生的抗体，称为多克隆抗体（polyclonal antibodies，PcAb）。
单克隆抗体：单一类型的只针对某一抗原决定簇的抗体分子，是由单一的B淋巴细胞克隆产生的结构和特异性完全相同的高纯度抗体。
抗原的制备
1.用基因工程技术制备重组蛋白抗原
2.提取纯化天然抗原
3.合成多肽半抗原
4.小分子半抗原
5.多肽半抗原及小分子半抗原与载体偶联
免疫
动物选择：Balb/c小鼠，品系一致
途径
体内，体外，脾内免疫
筛选阳性克隆及克隆化
克隆：由单个细胞繁殖扩增而形成性状均一的细胞集落的过程。
目的：筛选阳性克隆；确保杂交瘤细胞所分泌的抗体具有单克隆性以及从细胞群中筛选
出具有稳定表现型。
筛选阳性克隆鉴定
单克隆抗体活性检测方法：
1）酶联免疫吸附实验（ELISA）：可溶性抗原、细胞核病毒。2）放免测定（RIA）：可溶性抗原、细胞抗体。3）FAC（荧光激活细胞分选仪，流式培养仪）：针对细胞表面
抗原的抗体检测。
4）IFA（间接免疫荧光法）：用于细胞和病毒抗体的检测。
杂交瘤细胞的克隆化
（1）有限稀释技术 柏松分布（2）半固体琼脂培养法
0.5%琼脂培养基中进行克隆
1ml含不同数量的细胞悬液
1ml42度0.5%的琼脂液
单克隆抗体的大量制备
基因工程抗体（genetically engineered antibodies,gAb）
是通过基因工程技术研制的，即通过PCR技术获得抗体基因或抗体基因片段，与适当载体重组后引入不同表达系统所产生的抗体。基因工程抗体既保持了单抗的均一性、特异性强的优点，又能克服其为鼠源性的不足，是拓展单抗广泛人体使用的重要途径。
（一）嵌合抗体（chimeric antibody）
特点：是用人抗体的C区替代鼠的C区。效果：使鼠源性单抗的免疫原性明显减弱，并可延长其在体内的半衰期及改善药物的动力学。嵌合抗体的优点：
保持了亲本鼠单抗的特异性和亲和力；
减少人源性的恒定区的HAMA现象；
能有效地介导产生补体依赖的细胞毒作用(CDC)、抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用（ADCC）及免疫调理作用。缺点：
目前已有数十种嵌合抗体进入了临床试用，虽然HAMA现象较鼠单抗大为下降，但有相当比例的患者仍会出现HAMA症状，针对可变区的抗独特型抗体反应仍很明显。
（二）改型抗体（reshaped antibody，RAb）亦叫“重构抗体”，“CDR移植抗体（CDR grafting antibody）”。它是利用基因工程技术，将人抗体可变区（V）中互补性决定区（complementarity determinative region，CDR）的氨基酸序列改换成鼠源单抗CDR 序列。
特点：此种抗体可以使人单抗获得鼠单抗的特异性又保持人源抗体的亲和力。
动物
动物细胞分类
1、贴壁依赖性细胞 概念：anchoraged-dependent cell需要有适量带电荷的固体或半固体支持表面才能生长的细胞 大多数动物细胞都属于此类。
2、非贴壁依赖性细胞
概念：anchoraged-independent cell不依赖于固体支持物表面生长的细胞，可在培养液中悬浮生长，被称为悬浮细胞。举例：血液、淋巴细胞、肿瘤细胞和某些转化细胞，Namalwa细胞。
3、兼性贴壁细胞
概念：对支持物的依赖性不严格，既可贴壁生长，也可悬浮生长。举例：CHO细胞、BHK细胞、L929细胞。理想的药物生产细胞系
转基因技术的基本原理
将体外构建的重组DNA分子(目的基因或基因组片段)通过显微注射、或转染胚胎干细胞等方法注入动物的受精卵或着床前的胚胎细胞,然后将此受精卵或胚胎再植入受体动物的输卵管或子宫中，使其发育成携带外源基因的转基因动物。
同源重组
双链DNA的两个区段的DNA序列基本一致，但不一定完全相同，叫做同源区。同源的双链DNA可以通过相互交换进行重组。
外源DNA如有同源区，也可通过类似的同源重组过程整合到生物的染色体基因组上。
胚胎干细胞（Embryonic Stem Cell，ES）是从早期胚胎的内细胞团经体外培养建立起来的多潜能细胞系，具有胚胎细胞相似的形态特征和分化特征。
新型
反义技术：根据碱基互补原理，使用与目标靶的遗传物质（DNA或mRNA）特定互补的核苷酸片段来封闭基因表达的技术方法。
反义药物：人工合成或生物合成的DNA或RNA，能与RNA互补，抑制疾病基因的表达。反义核酸（antisense nucleic acid）是一段与靶基因的某段序列互补的天然存在或人工合成的核苷酸序列。它可通过碱基配对与细胞内核酸特异结合形成杂交分子，从而在转录和翻译水平调节靶基因的表达，具有合成方便、序列设计简单、容易修饰、选择性高、亲和力高等特点。
核酶(ribozyme)具有酶活性的RNA，可降解特异的mRNA序列。
RNA干扰（RNA interference，RNAi）
由双链RNA介导的细胞内特异性mRNA降解过程，导致靶基因的表达沉默。
基因导入方式
直接体内疗法（in vivo）
是指将目的基因直接导入体内有关的组织器官，使其进入相应的细胞并进行表达。间接体内疗法（ex vivo）
是指在体外将目的基因导入靶细胞，经过筛选和增殖后将细胞回输给患者，使该基因在体内有效地表达相应产物，以达到治疗的目的。
肿瘤的基因治疗
（一）通过抑癌基因抑制肿瘤细胞生长和诱导细胞凋亡。
（二）通过病毒感染杀伤肿瘤细胞
（三）通过诱导免疫系统识别并杀伤肿瘤细胞
（四）肿瘤的自杀基因治疗
（五）肿瘤抗原靶向的肿瘤基因治疗
（六）细胞因子基因治疗
第四篇：四川大学党校复习资料
简答题：
1.如何理解和把握党的十七大确定党的性质？
A、中国共产党是工人阶级的先锋队这一性质，指示了党的阶级性和先进性。工人阶级是党的阶级基础。党的先进性是中国共产党独具的本质特征，党的先进性主要表现为：第一，党是由工人阶级的先进分子所组成的。第二，党是以马列主义、毛泽东思想、邓小平理论武装起来的。第三，党是按照民主集中制原则建立起来的。
B、中国共产党是各族人民利益的忠实代表，这一性质是由党的工人阶级先锋队性质决定的。它明确了党同人民群众的关系，体现了党的宗旨。中国共产党是以工人阶级为阶级基础，代表工人阶级利益的党，这就决定了党的利益和工人阶级利益的一致性。由于工人阶级的利益和全国各族人民的利益又是一致的，所以党是全国各族人民利益的忠实代表。首先，工人阶级的利益体现了各族人民的根本利益。其次，工人阶级只有解放全人类才能最后解放自己。再次，党除了谋求工人阶级和各族人民的利益以外，没有自己的特殊利益。
C、中国共产党是社会主义事业的领导核心。这一性质表明了党的地位和作用。这是执政党领导问题中最根本的问题。
2.政党的基本特征是什么？
政党是社会政治上层建筑的组成部分之一，有别于国家机关和一般带有政治性的社会团体，具有以下几个显著的特征：第一，政党都有自己的政治纲领和政治目标。政党的政治纲领，可以是比较广泛的、长远的、战略性的，也可以是局部的、暂时的、策略性的。政党的政治目标，是争取和实现对国家政治生活的统治权，最低限度是干预和影响国家政治生活，以便维护自己所代表的阶级、阶层或社会集团的利益。第二，政党都有自己的组织和纪律。这种组织和纪律的严格程度虽有不同，但它总是政党聚集与发挥其政治力量所必需的。第三，政党都有自己的党员和所联系的群众。无论是在合法或非法的斗争中，一个政党的力量主要表现在它们拥有的党员和所联系的群众上。总之，政党具有鲜明的阶级性, 政党是制度化的组织 ,政党有自己的政治纲领, 政党围绕国家政权开展活动
3.十七大报告的主题（必考题）：高举中国特色社会主义伟大旗帜，以邓小平理论和“三个代表”重要思想为指导，深入贯彻落实科学发展观，继续解放思想，坚持改革开放，推动科学发展，促进社会和谐，为夺取全面建设小康社会新胜利而奋斗。
4．中国共产党的性质是什么（必考题）:中国共产党是中国工人阶级的先锋队，同时是中国人民和中华民族的先锋队，是中国特色社会主义事业的领导核心，代表中国先进生产力的发展要求，代表中国先进文化的前进方向，代表中国最广大人民的根本利益。党的最高理想和最终目标是实现共产主义。
5.科学发展观的基本要素是什么？ 科学发展观的四要素是以人为本、全面、协调、可持续。科学发展观，第一要义是发展，核心是以人为本，基本要求是全面协调可持续，根本方法是统筹兼顾。
6.入党需要履行的手续主要是什么：(1)要求入党的人，必须向党组织提出申请。入党申请一般以书面形式递交。(2)党组织对要求入党的积极分子进行一年以上的培养教育和考察。(3)对发展对象进行短期集中培训。(4)要有两名正式党员做入党介绍人。
(5)严肃认真地填写《中国共产党入党志愿书》。(6)支部委员会进行审查，并征求党内外群众的意见。(7)召开支部大会讨论，并且作出决议，及时报上级党组织审批。(8)上级党组织要派专人同发展对象谈话，认真负责地进行考察。(9)上级党组织集体审仳。(10)发展对象被批准为预备党员后，举行入党宣誓仪式。(11)预备党员预备期满后，向党组织提出书面转正申请，经支部大会讨论通过，报上级党组织审批合格者转为正式党员。
7.社会主义和谐社会的六个基本特征？
民主法治、公平正义、诚信友爱、充满活力、安定有序、人与自然和谐相处的充满活力的社会。
8.中国共产党宗旨的内涵是什么？
中国共产党的性质决定了一切从人民的利益出发，全心全意为人民服务是它的唯一宗旨。党的阶级性和先进性，决定我们党必须为工人阶级和人民群众谋利益。无产阶级革命就是要消灭一切剥削制度和产生剥削的根源，解放全人类。作为工人阶级先锋队的中国共产党从它诞生之日起，就是中国各族人民的忠实代表，就把全心全意为人民服务看作是根本宗旨。党在任何时候都把群众利益放在第一位，在工作中实行群众路线，一切为了群众，一切依靠群众，从群众中来，到群众中去，坚持不懈地反对腐败，加强党风建设和廉政建设。
9.社会主义荣辱观的具体内容是是什么？ 以热爱祖国为荣，以危害祖国为耻；以服务人民为荣，以背离人民为耻；以崇尚科学为荣，以愚昧无知为耻；以辛勤劳动为荣，以好逸恶劳为耻；以团结互助为荣，以损人利己为耻；以诚实守信为荣，以见利忘义为耻；以遵纪守法为荣，以违法乱纪为耻；以艰苦奋斗为荣，以骄奢淫逸为耻。
10.保持党员先进性教育活动要达到的目标的要求是什么？(一)提高党员素质。党员学习实践“三个代表”重要思想的自觉性、坚定性进一步增强，对新时期保持共产党员先进性的要求进一步明确，理想信念进一步坚定，先锋模范作用进一步发挥。(二)加强基层组织。党的基层组织在成为贯彻“三个代表”重要思想的组织者、推动者和实践者上取得新进展，战斗堡垒作用进一步发挥，党执政的组织基础进一步巩固。(三)服务人民群众。党员全心全意为人民服务的宗旨观念进一步增强，作风进一步改进，组织群众、宣传群众、教育群众、服务群众的本领进一步提高，党群、干群关系进一步密切，真正做到为民、务实、清廉。(四)促进各项工作。党的路线方针政策在各地区各部门各单位进一步贯彻，科学发展观和正确政绩观进一步树立和落实，各项工作取得新的进展。论述题：
1.谈谈你在本期党校学习中的最大收获？
对中国共产党这个神圣而又庄严的组织有了进一步的了解，让我对很多我没有兴趣的事情，改变了看法，现在我觉得马列主义毛泽东思想、邓小平理论，在思想文化领域上占指导地位，要使先进文化更好的前进发展；我们必须大力倡导学习科学文化知识，发展科学文化事业；必须坚持继承优良传统与吸收外来文明的有机统一；必须坚持文化的大众化。要使社会生产力先进；我们就要以经济建设为中心，集中力量发展生产力；要坚持改革开放，不断调整适应先进生产力发展的生产关系；要坚持科技创新，充分发挥科学技术对经济发展的推动作用。在以后的学习，工作当中我一定以马克思列宁主义、毛泽东思想为中心，严格遵守党的纲领和章程，认真履行党的权利和义务，积极向党组织靠拢。
2.照新时期党员的基本条件，简述如何才能成为一名合格的共产党员
共产党员必须具备的基本条件，具体来说包括以下三方面的内容：第一，“中国共产党党员是中国工人阶级的有共产主义觉悟的先锋战士”。这一规定要求党员要比一般工人群众具有更高的共产主义觉悟。
第二，“中国共产党员必须全心全意为人民服务，不惜牺牲个人的一切，为实现共产主义奋斗终身。” 第三，“中国共产党党员永远是劳动人民的普通一员。除了法律和政策规定范围内的个人利益和工作职权以外，所有共产党员都不得谋求任何私利和特权。”
（一）大学生党员要刻苦学习，努力掌握先进的科学知识。大学生党员首先是一名学生，而后才是一名党员，学生党员首先要在学生中起到旗帜作用。学生党员是朝气蓬勃的一代，是未来先进生产力的主要缔造者，在未来的社会主义建设中将起到中流砥柱的作用。因此，作为学生党员，要把专业学习放在非常重要的地位，努力在专业学习中走在前面，做出表率。只有不断学习当代最先进、最前沿的科学文化知识，才能跟上时代前进的步伐，才能永远处于先进性的行列。只有专业学习成绩突出，才能更具说服力和榜样性。知识就是本领，我们的知识越丰富，本领越强，对社会发展的贡献就会越大，为人民服务的贡献就会越大。
（二）大学生党员要加强理论学习，努力提高先进性素质。我国的改革开放和社会主义现代化建设进入了全面发展的阶段，我党正面临着复杂多变的形势，面临着微妙的国际形势，要适应这个新形势，出色地完成新任务，就必须坚持马克思主义的政治方向、政治立场、政治观点，防止和排除各种错误思想和倾向的干扰。共产党员的先进性不是天生具备的，而是通过不断地学习、实践、总结经验和提高自己的思想境界才形成的。在现实生活中，有些党员虽有过光辉的历史和业绩，但功成名就后，由于放松了理论学习，在物质、金钱、权力面前倒下了。前车之鉴，我们学生党员要引以为戒，必须学习政治理论，用马克思列宁主义、毛泽东思想、邓小平理论和“三个代表”重要思想来武装自己的头脑，要通过学习科学理论不断校正自己的世界观、人生观和价值观，才能具备拒腐防变和抵御风险的能力，才能把共产主义的理想情操、党性原则和全心全意为人民服务的宗旨化成自己的信念和行动，真正做到思想上入党，立志成才，报效祖国，在政治上、纪律上、思想作风上为周围同学作出榜样与楷模。
（三）大学生党员要全心全意为同学服务，牢固树立党员先进性意识。党的宗旨是全心全意为人民服务，学生党员平时接触最多的是周围的同学，因此有责任、有义务为同学们服务。在学生工作上，要为同学们提供便利的条件，想同学之所想，急同学之所急，为他们办实事，尽量丰富他们的课余生活。用良好的党员形象感染身边的每一位同学。在学习上，作为学生党员不仅要具有良好的专业文化知识，而且要尽心尽力地帮助学习上有困难的同学，带动大家共同进步。在学校的学风建设中，要以身作则，坚决杜绝考试作弊的行为，制止同学们的作弊行为。在生活上，作为学生党员应该关心、帮助生活上有困难的同学，要善于与同学沟通，发现心理有问题的同学，要及时与其沟通，进行有效的心理辅导。在政治上，作为学生党员要与党中央保持一致，识大体，顾大局，积极向同学宣传党的路线、方针、政策，主动联系同学，成为维护学校和社会稳定的中坚力量。作为学生党员，我认为先进性应体现在日常的学习、生活和从事学生干部的工作中。平时我们应带头刻苦学习、生活上应严于律己并敢于同一切不良行为和现象作斗争、工作要积极热情、要树立全心全意为同学服务的思想。我认为当前学生党员发挥作用遇到的最大困难是参加政治学习的机会较少、理论联系实际的能力比较欠缺。今天上午我们学生支部以讨论的形式，结合学习与生活实际，探讨在班风、学风建设中如何发挥和体现学生党员的先进性。同时，下午我院组织了学生去总院听了周小燕事迹报告，还观看了体现党员光辉形象的影视片《任长霞》，从中感受党的先驱们为了党的事业抛头颅，撒热血。这种大无畏的革命英雄主义精神，塑造党的光辉形象。
（四）大学生党员要以身作则，在学生中起先锋模范作用，着力塑造先进性形象。党员的先进性不仅仅是一种思想境界，它更是在实践中的积极参与及奉献行为。学生党员在政治思想、道德品质、专业学习方面，起着带头、示范作用；在日常活动、党日活动、社会活动中，起着表率、凝聚作用；在学校、教师和学生的联系上，起着桥梁、纽带作用。学生党员的言行和形象在广大学生中有很强的号召作用，因此应把党性作为自己应有的品格和行为准则，加强党性锻炼，展示良好形象。具体来说，学生党员要积极组织和参加各种校园文化活动，带动同学共同建设好优秀团支部、先进班级体和文明宿舍。只要我们每个大学生党员都从我做起，从现在做起，主动适应时代要求，在日常学习、工作和生活中自觉实践先进性要求，发挥先进性作用，树立先进性形象，时刻保持共产党员的先进性，就一定能在全面建设小康社会的历史进程中，担负起我们去发展先进科学技术、传播社会主义精神文明和维护社会稳定的历史重任。作为一名学生党员，学生党员的先进性主要体现在明确历史使命，增强责任意识，争做品学兼优、励志成才的典范。今天上午的学习中，社区的马老师曾讲过：“作为党员要做到荣誉面前不争功，成绩面前不自傲，困难面前不退缩，塑造起自己的先进性形象，从而真正体现“一个党员一面旗”。我们大学生是祖国的未来，党和人民寄予厚望。我们学生党员是整个党员队伍的新生力量，也是大学生队伍中的先进分子。我们在大学生中所占比例虽小，但作用大，影响大，年龄轻，自身可塑性强，在大学生中的认同感强。因此，学生党员先进性的体现不仅关系到高校党的建设状况，更影响到大学生整体素质的提高。学生党员的先进性体现在全面发展上，既要成为大学生思想政治建设的先锋，又要作专业学习的标兵和工作生活的楷模。以上几点我认为是新时期大学生党员结合自身实际，体现先进性的具体要求，是每一位学生党员应追求的目标。在日常的学习、工作和生活中，大学生党员要以共产党员的标准来严格要求自己，做到“服务社会、帮助他人、完善自己、弘扬新风”的行动宗旨，努力做好“三个代表”重要思想的学习者和实践者。
3.联系大学生实际，谈谈入党积极分子如何实践“三个代表”重要思想
大学生和大学生党员是未来社会的中坚，是党的事业的接班人，是建设社会主义事业源源不断的生力军和骨干力量，振兴中华，实现现代化的重任已经历史地落在了我们大学生的肩上。因此，学习和实践“三个代表”的重要思想是当前和今后一段时期提高大学生思想政治素质的重要理论武器，是提高全民族的素质，促进两个文明建设，加速建设社会主义现代化，为国家多出人才，出好人才，实现社会主义蓝图的一个战略性问题。“三个代表”的重要思想，是以江泽民为核心的党中央站在世纪交替的高度，着眼我国改革开放和社会主义现代化建设的全局，总结历史，立足现实，展望未来作出的精辟论断，是对党的性质，宗旨和历史任务的新概括，是对马克思主义建党学说的新发展，是对各级党组织和广大党员的新要求，尤其是对我们青年学生提出了更高的要求，表达了更为殷切的希望。江总书记在“七一讲话”中强调：“全国各族青年，代表着我们祖国和民族的未来，代表着我们事业兴旺发达的希望。社会主义现代化的宏伟事业需要你们去建设，中华民族的伟大复兴将在你们手中实现。党和人民对你们寄托着殷切的期望。希望你们热爱祖国，热爱人民，志存高远，胸怀宽广，在改革开放和现代化建设的广阔舞台上，充分发挥自己的聪明才智，展现自己的人生价值，努力创造无愧于时代和人民的业绩。” 一个党是一个整体，这个整体需要我们每个党员来维护，这对我们每个大学生党员能否真正代表“三个代表”，能否按照“三个代表”提出的要求和方向去发展自己，显得至关重要。大学生党员骨干具有较高的政治素质，党性观念强，学业优秀，他们站在大学生队伍的排头兵位置，充分体现了党员的先进性。要学好“三个代表”，学生党员骨干要带头树立三种意识：
（一）要树立坚定的“方向意识”。当前，我们正处在深刻的社会变革时期，经济成份、利益主体、社会组织、社会生活方式日趋多样化，人们的价值观念、价值取向发生明显的变化，有的甚至出现思想困惑和信仰危机。西方敌对势力亡我之心不死，加紧对我实施“西化”、“分化”的图谋，妄想与我党争夺年轻一代。我们一要学习毛泽东思想特别是邓小平理论，不断以科学理论来增强武装头脑的自觉性。二要自觉接受党内生活的锻炼，提高党性修养，不断增强实践理想信念的坚定性。三要立志投身于改革开放的伟大实践，要从党的事业取得的伟大成就中，不断增强对党最终实现最高目标的必胜信心。
（二）要树立强烈的“求知意识”。21世纪的竞争是综合国力的竞争，归根结底是科学文化的竞争，是技术创新的竞争。作为先进生产力、先进文化代表的学生党员和学生干部，必须要以一种时不待我的紧迫感和危机感，高度重视并积极投身科学进步与创新。大学生普遍文化程度较高、思维比较活跃、求知欲较强、接受新事物较快，理应成为学习科学文化技术的模范。
（三）要树立牢固的“自律意识”。作为学生党员，应该有良好的品性修养。大学生正处于世界观、人生观、价值观不断成熟阶段，更要加强优秀品格的锻炼，要时时刻刻以党员和“四有”新人的标准来要求自己，要时时向优秀党员，优秀模范学习。新的世纪，百年的梦想，千年的辉煌，等待我们去创造，今日大学生党员要好好深入地学习和实践“三个代表”重要思想，壮大学生骨干队伍，促进正确的认识。在不断的学习和实践中学到更多的东西，明确自己肩负的责任，发挥自己的能力，为祖国的建设贡献出自己的一份力量。
对我们大学生而言，从现在起就要牢固树立为人民服务的思想，从自己做起，从现在做起，积极发挥党员先进模范带头作用，尽自己之所能，把为人民服务落实到实践当中去。
4.中国共产党为什么要以马克思列宁主义、毛泽东思想、邓小平理论和“三个代表”作为自己的行动指南?（1）列宁曾经指出：“没有革命的理论也就不可能有革命的运动”，“只有以先进理论为指南的党，才能实现先进战士的作用”。（2）马克思主义揭示了世界发展的普遍规律特别是人类社会历史发展的普遍规律，揭示了社会主义必然代替资本主义以及建设社会主义、最终实现共产主义的普遍规律，是无产阶级和劳动人民认识世界和改造世界的强大思想武器。中国共产党是按照马克思列宁主义建党学说建立起来的无产阶级政党。党从成立起，就坚决有力地驳斥了“马克思列宁主义不适合中国国情”的谬论，坚持以马克思列宁主义作为自己的行动指南。我们党的奋斗历史告诉我们，只要把马克思列宁主义的基本原理同中国革命的具体实践相结合，科学地总结自己的经验，确定符合中国国情的前进道路和战略策略，我们的事业就能不断取得胜利。（3）以毛泽东为代表的中国共产党人，把马克思列宁主义的基本原理同中国革命的具体实践结合起来，创立了毛泽东思想。毛泽东思想是马克思列宁主义在中国的运用和发展，是被实践证明了的关于中国革命和建设的正确理论原则和经验总结，是中国共产党集体智慧的结晶。（4）十一届三中全会以来，以邓小平同志为代表的中国共产党人，总结建国以来正反两方面的经验，解放思想，实事求是，实现全党工作中心向经济建设转移，实行改革开放，开辟了社会主义事业发展的新时期，逐步形成了建设有中国特色社会主义的路线、方针、政策，阐明了在中国建设社会主义、巩固和发展社会主义的基本问题，创立了邓小平理论。邓小平理论是马克思列宁主义基本原理同当代中国实践和时代特征相结合的产物，是毛泽东思想在新的历史条件下的继承和发展，是马克思主义在中国发展的新阶段，是当代中国的马克思主义。（5）十三届四中全会以来，以江泽民同志为主要代表的中国共产党人，在建设中国特色社会主义的实践中，加深了对什么是社会主义、怎样建设社会主义和建设什么样的党、怎样建设党的认识，积累了治党治国新的宝贵经验，形成了“三个代表”重要思想。“三个代表”重要思想是对马克思列宁主义、毛泽东思想、邓小平理论的继承和发展，反映了当代世界和中国的发展变化对党和国家工作的新要求，是加强和改进党的建设、推进我国社会主义自我完善和发展的强大理论武器，是中国共产党集体智慧的结晶，是党必须长期坚持的指导思想。
第五篇：四川大学团校复习资料
四川大学第十四届团校考试复习资料
1.2.3.4.中国共产主义青年团代团歌为《光荣啊!中国共青团》,作词胡宏伟,作曲雷雨声.我校的校风是：严谨、勤奋、求是、创新；校训是：海纳百川，有容乃大。我校现行的管理运行机制是：以院系为管理重心，以教师为办学主体，以学生为育人中心。2001年评选的古今100位“四川文化名人”的近代50人中，有36人为川大校友。两院院士中50人为川大校友。
5.我校的人才培养目标是：培养“具有深厚的人文底蕴、扎实的专业知识、强烈的创新意识、宽广的国际视野的国家栋梁和社会精英”。
6.我校本科人才培养分为三大类型：研究型、应用型和技术型。
7.四川大学创办于1896年。新四川大学的校庆日是每年的9月29日
8.我校人才管理模式是人性化管理、个性化教育、国际化培养.9.我校的办学目标是建设中国一流的高水平研究型综合大学.10.我校的办学理念是以人为本,崇尚科学,追求卓越.11.我校人才培养的原则是分类指导,个性培养,注重创新,面向世界.12.我校定期举办的大型学生文化艺术活动有：“凤凰展翅”四川大学学生文化艺术节；四川大学毕业生文化节；四川大学学生团体文化节（原社团文化节）。
13.中国共产主义青年团是中国共产党领导的先进青年的群众组织，是广大青年在实践中学习中国特色社会主义和共产主义的学校，是中国共产党的助手和后备军。
14.中国共产主义青年团在现阶段的基本任务是：坚定不移地贯彻党在社会主义初级阶段的基本路线，以经济建设为中心，坚持四项基本原则，坚持改革开放，在建设中国特色社会主义的伟大实践中，造就有理想、有道德、有文化、有纪律的接班人，努力为党输送新鲜血液，为国家培养青年建设人才，团结带领广大青年，自力更生，艰苦创业，积极推动社会主义物质文明、政治文明和精神文明建设，为全面建设小康社会、加快推进社会主义现代化贡献智慧和力量。
15.年龄在十四周岁以上，二十八周岁以下的中国青年，承认团的章程，愿意参加团的一个组织并在其中积极工作、执行团的决议和按期交纳团费的，可以申请加入中国共产主义青年团
16.团员年满二十八周岁，没有担任团内职务，应该办理离团手续。团员加入共产党以后仍保留团籍，年满二十八周岁，没有在团内担任职务，不再保留团籍。
17.“推优工作”是指推选优秀团员做党的发展对象.18.企业、农村、机关、学校、科研院所、街道社区、社会团体、社会中介组织、人民解放军连队、人民武装警察部队中队和其他基层单位，凡是有团员三人以上的，都应当建立团的基层组织.19.中国共产主义青年团团员证封面为墨绿色，象征着青春和朝气蓬勃的青年运动；封面上方印有红色烫金团徽，象征着共青团是团结教育青年的核心。团的组织和团员应按规定管理和使用团员证。
20.团的经费来源主要是：团员交纳的团费、党和政府以及企事业单位关于青少年事业的专项经费、团属经济实体收益、正当的社会资助和团组织的其它合法收入。
21.支部委员会、总支部委员会由团员大会选举产生，每届任期两年或三年，其中大、中学校学生支部委员会每届任期一年。基层委员会由团员大会或代表大会选举产生，每届任期三年至五年。
22.“党建带团建”是加强团的基层组织建设的基本原则。要积极争取各级党组织支持，推动基层落实好“党建带团建”，形成规范的工作制度，把党的要求贯彻落实到团的建设之中，使团的建设纳入党的建设总体规划。
23.留团察看的时间为六个月或一年。团员在留团察看期间没有选举权、被选举权和表决权，不得作青年
入团的介绍人。留团察看期满，改正了错误的，应当及时恢复其团员的上述权利；坚持错误不改的，应当开除团籍。
24.中国共产主义青年团在维护我国的独立和主权，坚持和平友好、独立自主、相互学习、平等合作、共同发展的基础上，积极发展同世界各国青年组织的交往和友好关系，反对霸权主义和强权政治，维护世界和平，促进人类进步。
25.团费的交纳和管理使用办法由中央委员会统一规定。
26.当前，在团的基层组织制度建设中，要重点做好以下几个方面的工作：健全团的基层组织设置制度，健全团的组织生活制度，健全团员发展教育管理制度，健全基层团干部培养教育管理制度，健全团的组织工作制度，健全团内民主制度。
27.党的十一届三中全会以来，共青团根据党的工作重心的转移，紧密围绕改革开放和经济建设开展工作，为推进社会主义现代化建设事业作出了重要贡献，促进了青年一代的健康成长。
28.团的省、自治区、直辖市、省辖市、自治州代表大会每五年举行一次。
29.中国青年运动的旗帜是爱国主义。中国青年运动的正确路线是在中国共产党的领导下同人民紧密结合，为祖国奉献青春.30.对于不执行团的决议、违反团章的团员，团的组织应当本着惩前毖后、治病救人的精神，进行批评和帮助，情节严重的，给以纪律处分。处分分为：警告，严重警告，撤销团内职务，留团察看，开除团籍。
31.申请入团的青年应有两名团员作介绍人。
32.团支部干部应具备的作风修养通常包括密切联系青年群众、实事求是的态度、朝气蓬勃的作风、谦虚的品格四个方面。
33.共青团中央、全国青联授予青年的最高荣誉称号是中国青年五四奖章。共青团中央对基层团委的最高综合性奖励称号是全国五四红旗团委
34.团的县（市、旗）、自治县、市辖区代表大会每三年举行一次。
35.团的任何一级组织或个人都无权剥夺团员的权利。
36.中国共产主义青年团团旗旗面为红色，象征革命胜利；左上角缀黄色五角星，周围环绕黄色圆圈，象征中国青年一代紧密团结在中国共产党周围。团的重要会议以及团日活动可以使用团旗。
37.新团员必须在团旗下进行入团宣誓。誓词如下：我志愿加入中国共产主义青年团，坚决拥护中国共产党的领导，遵守团的章程，执行团的决议，履行团员义务，严守团的纪律，勤奋学习，积极工作，吃苦在前，享受在后，为共产主义事业而奋斗。
38.基层团务工作包括：1）、团支部组建、改选；2）、发展新团员；3）、团员的奖励与处分；4）、团费收缴与使用；5）、团籍注册；6）、团组织关系转接；7）、团支部独立活动
39.团员证有哪些主要功能？（1）证明团员政治身份；（2）接转团员组织关系；（3）方便团员参加团内活动；（4）进行团员团籍注册；（5）作为团员超龄离团后的永久纪念。
40.2009年7月11日，国学大师季羡林去世。
41.季羡林先生说过：要说真话，不讲假话。
自己生存，也让别的东西生存，这就是善；
只考虑自己生存，不考虑别人生存，这就是恶！
42.校团委文艺部分为办公室、理论研究中心、宣传中心、交流活动中心四个部门。干部分布为：部长一名，副部长四名，下面四个二级部门分别设置正职一名，副职三名。
43.凤凰展翅”四川大学文化艺术节作为我校培养学生综合素质的重点措施，自1999年蹒跚起步之始，便得到了学校党政领导的高度重视与亲切关怀。校党委书记及校长亲自担任顾问，各相关部门通力配合，付出了大量心血。如今，“凤凰展翅”业已走过了风雨兼程的十余年光阴。
44.川大辩论两大权威性校级赛事：目前川大辩论竞赛活动的主阵地主要是校内两大赛事“凤凰展翅”四川大学文化艺术节“智慧川大人”辩论赛四川大学“学院杯” 辩论赛。
45.学生社团的重要功能：有利于完善学生的个性，培养一专多能的合格人才； 有利于推动校园文化建设； 有利于推行素质教育，深化高校体制改革； 有利于促进大学生形成稳定的心理状态； 是学生“三自”教育的阵地。
46.社团在校园文化建设中的地位毋庸置疑，其作用方式集中体现在“发展社团文化，更好地为校园文化建设服务”这一宗旨上。
47.服务青年就业创业是共青团十六大确定的全团重点工作。
48.王蕾老师对大家的 三点希望 ：要把学习作为成长进步的第一要求，丰富知识，拓展视野 ；要把实践作为检验能力的第一考场，始终做到务实奋进 ；要把奉献作为体现价值的第一追求，不断作出新的贡献.49.志愿者是指不为物质报酬，基于良知、信念和责任，自愿为社会和他人提供服务和帮助的人。志愿工作具有志愿性、无偿性、公益性、组织性四大特征。
50.团组织历来关心和重视志愿者工作：1993年底，共青团中央决定实施中国青年志愿者行动;1994年12
月5日，团中央成立了中国青年志愿者协会;1998年8月，团中央成立了青年志愿者行动指导中心;2002年，团中央颁布《中国青年志愿者注册管理办法(试行)》;2006年12月，团中央正式颁布《中国注册志愿者管理办法》
51.中国志愿服务的起源： 1993年底，共青团中央决定实施中国青年志愿者行动。12月19日，2万余名铁路青年率先打出了“青年志愿者”的旗帜、在京广铁路沿线开展了为旅客送温暖志愿服务。之后，40余万名大中学生利用寒假在全国主要铁路沿线和车站开展志愿者新春热心行动，青年志愿者行动迅速在全国展开。十六年来，青年志愿者行动不断发展，志愿服务的领域不断扩大，志愿者队伍日益壮大。
52.四川大学青年志愿者行动始于1994年初。在校团委的领导下，于1997年9月12日正式成立了四川大学青年志愿者总队，并于2004年改组为四川大学青年志愿者协会。四川大学青年志愿者协会在校团委的直接领导下，负责全校志愿者和志愿服务的组织和管理。
53.“挑战杯”全国大学生系列科技学术竞赛由江泽民同志亲自题写杯名，由团中央、教育部、中国科协、全国学联联合主办，分课外学术科技作品竞赛和创业计划竞赛两类，每两年一届间隔举办，已被公认为中国大学生的“科技奥林匹克圣会”。
54.2008年11月16日第六届“挑战杯”中国大学生创业计划竞赛决赛在四川大学举行，来自内地的109所高校的150支大学生团队以及港澳地区的18支大学生团队在角逐金银铜奖。
55.中国大学生体育协会网球分会主办、四川大学承办的第十四届全国大学生网球锦标赛于7月28日—8 月3日在我校江安校区隆重举行，共有来自各省市领导、全国150所的高校的领队、教练和学生运动员齐聚我校，角逐大网赛桂冠。
56.中国西部国际博览会由国家发改委、中国商务部等十一部委和西部十二省区市及新疆生产建设兵团共同主办，是目前中国西部集商品展览、经贸交流、招商引资、高端论坛为一体的大型经贸博览会。2009年10月16日至20日，第十届中国西部国际博览会在四川成都隆重举行。大会将围绕“把握机遇、应对挑战、开放合作、共赢发展”的主题，组织开展了一系列重大活动。
57.“挑战杯”中“大挑”指“挑战杯”中国大学生课外学术科技作品竞赛；“小挑”指“挑战杯”中国大学生
创业计划竞赛。
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