植物中淀粉含量测定

第一篇：植物中淀粉含量测定

实验 14 植物组织中淀粉含量的测定

Ⅰ 蒽酮硫酸法

一、原理

淀粉是由葡萄糖残基组成的多糖，在酸性条件下加热使其水解成葡萄糖，然后在浓硫酸的作用下，使单糖脱水生成糠醛类化合物，利用蒽酮试剂与糠醛化合物的显色反应，即可进行比色测定。

二、实验材料、试剂与仪器设备

（一）实验材料

任何植物材料。

（二）试剂

• 浓硫酸（比重 1.84）。

• 9.2mol/L HClO 4。

• 蒽酮试剂，同实验 24。

（三）仪器设备

电子天平，容量瓶： 100 mL 4 个、50 mL 2 个，漏斗，小试管若干支，电炉，刻度吸管 0.5mL 1 支、2.0 mL 3 支、5 mL 4 支，分光光度计，记号笔。

三、实验步骤

1.标准曲线制作 同实验 24 恩酮法。

2.样品提取 称取 50 ～ 100 mg 粉碎过 100 目筛的烘干样品，置于 15 mL 刻度试管中，加入 6 ～ 7 mL 80 ％乙醇，在 80 ℃水浴中提取 30 min，取出离心（3000 rpm）5 min，收集上清液。重复提取两次（各 10 min）同样离心，收集三次上清液合并于烧杯，置于 85 ℃恒温水浴，使乙醇蒸发至 2 ～ 3 mL，转移至 50 mL 容量瓶，以蒸馏水定容，供可溶性糖的测定。

向沉淀中加蒸馏水 3 mL，搅拌均匀，放入沸水浴中糊化 15 min。冷却后，加入 2 mL 冷的 9.2 mol/L 高氯酸，不时搅拌，提取 15 min 后加蒸馏水至 10 mL，混匀，离心 10 min，上清液倾入 50 mL 容量瓶。再向沉淀中加入 2 mL 4.6 mol/L 高氯酸，搅拌提取 15 min 后加水至 10 mL，混匀后离心 10 min，收集上清于容量瓶。然后用水洗沉淀 1 ～ 2 次，离心，合并离心液于 50 mL 容量瓶用蒸馏水定容供测淀粉用。

3.测定 取待测样品提取液 1.0 mL 于试管中，再加蒽酮试剂 5 mL，快速摇匀，然后在沸水浴中煮 10 min，取出冷却，在 620 nm 波长下，用空白调零测定光密度，从标准曲线查出糖含量（μg）。

四、结果计算

式中： C ——从标准曲线查得葡萄糖量，μg。

V T ——样品提取液总体积 , mL。

V 1 ——显色时取样品液量，mL。

W ——样品重，g。

0.9 ——由葡萄糖换算为淀粉的系数。

Ⅱ 碘-淀粉比色法

一、原理

对于淀粉含量较少的植株样品，也可采用碘–淀粉比色法。淀粉在加热情况下能溶于硝酸钙溶液中，当碘化钾和硝酸钙共存时，碘能以碘–淀粉蓝色化合物沉淀全部淀粉。将此沉淀溶于碱液，并在酸性条件下与碘作用形

成蓝色溶液进行比色。

二、实验材料、试剂与仪器设备

（一）实验材料

任何植物材料。

（二）试剂 ． 80 ％硝酸钙溶液。． 0.5 ％碘液：称 5.00 g 结晶碘和 10.00 g 碘化钾，放入研钵混合干研，然后加 10 mL 蒸馏水研至全部碘溶解，将溶液全部转入 1000 mL 容量瓶定容后，贮于磨口试剂瓶。． 5 ％含碘硝酸钙溶液：取 10 mL 80 ％的硝酸钙溶液，加入 160 mL 水再加入 3 mL 0.5 ％的碘液混匀，现用现配。．标准淀粉溶液：称取纯淀粉 50 mg 于研钵中，加 3 mL 80 ％硝酸钙溶液，研细并转移到 100 mL 的三角瓶中，用 15 mL 80 ％的硝酸钙溶液冲洗研钵，无损地收集于三角瓶中。将三角瓶置于沸水浴中煮沸 5 min，冷却后全部转入 50 mL 容量瓶中并定容。此液为 1 mg/mL 的淀粉标准液。． 0.1 mol/L NaOH。． 0.1 mol/L HCl。

（三）仪器设备

分析天平，研钵，容量瓶，量筒，三角瓶，水浴，小漏斗，电炉，离心机，离心管，试剂瓶。

三、实验步骤 ．称取 1 ～ 3 g 叶片，剪碎放入研钵，加 5 mL 80 ％的硝酸钙溶液，研磨成糊状移入 100 mL 的三角瓶中，用 10 mL 80 ％的硝酸钙冲洗研钵，无损地收集于三角瓶中，瓶口盖上小漏斗，在沸水浴上煮沸 3 ～ 5 min（叶片含淀粉少的 3 min，含淀粉多的 5 min），使样品中淀粉转变为胶体溶液。．给三角瓶中加 20 mL 蒸馏水，混合液转入离心管中离心（202_ ～ 3000 rpm）2 ～ 3 min，将离心后的淀粉胶体浑浊液移入 100 mL 容量瓶（淀粉含量少时，可移入 50 mL 容量瓶），三角瓶及离心沉淀物用 5 ～ 10 mL 热蒸馏水冲洗并同样离心，离心液并入容量瓶中（共洗 2 ～ 3 次）定容，即为淀粉提取液。．取 5 ～ 10 mL 淀粉待测液，加入到盛有 2 mL 0.5 ％碘液的离心管中，混匀静置 15 min 后离心（3000 rpm）5 min，弃上清液。沉淀用 5 ％的含碘硝酸钙溶液冲洗两次，向冲洗后的沉淀中加入 10 mL 0.1 mol/L 的 NaOH 混匀，将离心管浸入沸水内 5 min，使沉淀溶解。将溶液转入 50 mL 容量瓶中，加入 0.3 mL 0.5 ％碘液，用 30 mL 左右的水冲洗并入容量瓶，加入 2 mL 1mol/L 的盐酸，用水定容并显色，在 590 nm 波长处测定光密度。．绘制标准曲线 取标准淀粉溶液（1 mg/mL）0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL 于 6 个离心管中，用 80 ％硝酸钙溶液将各管的体积补足至 5 mL，再向各管加入 2 mL 0.5 ％碘液，混匀静置 15 min 后离心，其他操作同样品测定步骤，显色后在 590 nm 波长下测定光密度。此系列溶液的淀粉含量分别为 0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mg，然后以光密度为横坐标，以淀粉含量为纵坐标绘制标准曲线。

四、结果计算

式中： C ——从标准曲线查得葡萄糖量，mg。

V T ——样品提取液总体积 , mL。

V 1 ——显色时取样品液量，mL。

W ——样品重（g）。

变性淀粉在调味酱中的应用

调味品在九十年代开始了规模化生产，特别是在近几年，调味品也向品牌化发展，生产工艺由原来的手工制作变成机械化生产，这也就需要生产原料能适应工业化生产需求。

作为调味酱中的增稠稳定剂也在不断的变化，先后出现了原淀粉、简单变性淀粉、天然胶（植物胶、动物胶、微生物胶）、复配增稠剂、复合变性淀粉。

不同的调味酱，它们的特性要求和加工工艺不同，所选用的增稠添加剂也不相同。本文主要谈谈怎样选择合适的增稠稳定剂。

1、几种增稠剂在苹果沙拉酱中作用

苹果沙拉酱生产过程中，需要长时间的煮制，同时苹果酱需要在酸性条件下保存。这就需要所选用的增稠稳定剂具有耐高温和耐煮制，同时在酸性条件下稳定。几种增稠剂（添加量为5%）在苹果酱中（室温条件下放置30天后检测）的使用结果见表1

由表1可知道：卡拉胶、复合变性淀粉在苹果酱中作用明显；玉米淀粉保水稳定性较差，容易老化结块；复合增稠剂比玉米淀粉稍好。卡拉胶具有天然的稳定大分子结构，耐酸性、保水性粘度都很好，是良好的食品增稠剂，但由于卡拉胶价格高，其使用范围受到限制。淀粉由于其价格较低、增稠稳定性好，已越来越被生产厂家看重。

原淀粉价格低，但其理化特性不稳定，不适宜苹果酱的生产；原淀粉抗老化性弱，容易析水结快，如果储藏条件不好，产品性能不稳定，会分层析水。但是变性淀粉具有稠度高、稳定性好、成型性好等特点，可使制品在高温、煮制和搅拌后仍能恢复原状，保持柔滑的体态不变稀；同时可赋予制品较好的组织结构，使果酱口感爽滑，有较强的实体感。变性淀粉的透明度、成膜性都较高。

加入后提高产品的透明度，同时赋予产品光滑、色泽鲜艳的外观。同时变性淀粉耐酸性强，可加强制品在酸性环境下稳定性、延长储藏期。

2、几种增稠剂在番茄酱中作用

对番茄酱，稠度和色泽的稳定性非常重要。同时由于番茄酱营养丰富，低分子糖类物质含量高，极易败坏，一般会加入防腐剂，现在越来越提倡使用天然防腐剂，使用最广的为大蒜素，使用大蒜素时有一个较大的缺点，味道太浓。所以希望有一种能掩盖和延缓风味物质释放的添加剂。

本实验通过添加不同的增稠掩盖剂，添加量为5%：明胶、木薯淀粉、海藻酸钠、江西东永的DY-DPP-2变性淀粉。结果见表2（室温条件下放置30天后检测）

由表2可以知道：明胶和DY-DPP-1的在色泽、稳定性、稠度和口感综合效果明显；木薯原淀粉性质不很稳定，加热后易老化，造成产品失水变稀，不利于消费者使用时后处理；明胶的效果最明显，综合性质好，但由于其价格较高，不能被广大消费者采纳；海藻酸钠酸性条件下不是很稳定，容易分解失效。

变性淀粉有很强的吸水保水性、较高的透明度、成膜性好、稳定性强等特点。复合变性淀粉有很多的亲水基团（本身的羟基和外来的极性基团），有很好的保水性，强保水性可以很好的提高酱类制品中的水分含量，同时降低其它原料的含量，比如蔗糖、饴糖等量大对人体不利的低糖。淀粉糊化后有很好的透明度和表面光泽，可以很好地与其他物质结合，形成透明有弹性的均匀分散体系，从而使添加的色素和风味物质稳定。

因为变性淀粉引入了其它外来极性基团，增强了亲水性和空间稳定性，可以很好地与制品中的某些成分络合，形成稳定的物质，能改善产品的风味和色泽。同时产品有较好的耐酸、耐热性，可以稳定产品的PH和色泽（有色物质对PH敏感）。耐热性可以加强产品的加工性。

综上所述，变性淀粉，特别使复合变性淀粉对提高酱类制品的理化性质有明显的功效，而且克服了使用天然胶造成产品成本高等不足。

第二篇：植物组织中淀粉含量的测定

植物组织中淀粉含量的测定 202_-01-12 08:55 Ⅰ 蒽酮硫酸法

一、原理

淀粉是由葡萄糖残基组成的多糖，在酸性条件下加热使其水解成葡萄糖，然后在浓硫酸的作用下，使单糖脱水生成糠醛类化合物，利用蒽酮试剂与糠醛化合物的显色反应，即可进行比色测定。

二、实验材料、试剂与仪器设备

（一）实验材料 任何植物材料。

（二）试剂

浓硫酸（比重 1.84）。9.2mol/L HClO 4。

2%蒽酮试剂，同实验 24。

（三）仪器设备

电子天平，容量瓶： 100 mL 4 个、50 mL 2 个，漏斗，小试管若干支，电炉，刻度吸管 0.5mL 1 支、2.0 mL 3 支、5 mL 4 支，分光光度计，记号笔。

三、实验步骤

1.标准曲线制作

取小试管11支从0～10编号，按表24-3加入溶液和蒸馏水。

以下步骤按苯酚法或蒽酮法均可，见方法一或方法二，绘制相应的标准曲线。

表24-3 各试管加入标准液和蒸馏水量

管 号 0 1～2 3～4 5～6

7～8 9～10 淀粉标准液(ml)

0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0 蒸 馏 水（ml）

2.0 1.6 1.2 0.8 0.4 0

淀粉含量（mg）

0 40 80 120 160 200 2.样品提取 称取 50 ～ 100 mg 粉碎过 100 目筛的烘干样品，置于 15 mL 刻度试管中，加入 6 ～ 7 mL 80 ％乙醇，在 80 ℃水浴中提取 30 min，取出离心（3000 rpm）5 min，收集上清液。重复提取两次（各 10 min）同样离心，收集三次上清液合并于烧杯，置于 85 ℃恒温水浴，使乙醇蒸发至 2 ～ 3 mL，转移至 50 mL 容量瓶，以蒸馏水定容，供可溶性糖的测定。

向沉淀中加蒸馏水 3 mL，搅拌均匀，放入沸水浴中糊化 15 min。冷却后，加入 2 mL 冷的 9.2 mol/L 高氯酸，不时搅拌，提取 15 min 后加蒸馏水至 10 mL，混匀，离心 10 min，上清液倾入 50 mL 容量瓶。再向沉淀中加入 2 mL 4.6 mol/L 高氯酸，搅拌提取 15 min 后加水至 10 mL，混匀后离心 10 min，收集上清于容量瓶。然后用水洗沉淀 1 ～ 2 次，离心，合并离心液于 50 mL 容量瓶用蒸馏水定容供测淀粉用。

3.测定 取待测样品提取液 1.0 mL 于试管中，再加蒽酮试剂 5 mL，快速摇匀，然后在沸水浴中煮 10 min，取出冷却，在 620 nm 波长下，用空白调零测定光密度，从标准曲线查出淀粉含量（mg）。

四、结果计算 ：含量（%）=100*C*VT/V1*1000*W

式中： C ——从标准曲线查得淀粉量，mg。V T ——样品提取液总体积 , mL。V 1 ——显色时取样品液量，mL。W ——样品重，g。

0.9 ——由葡萄糖换算为淀粉的系数。

Ⅱ 碘-淀粉比色法

一、原理

对于淀粉含量较少的植株样品，也可采用碘–淀粉比色法。淀粉在加热情况下能溶于硝酸钙溶液中，当碘化钾和硝酸钙共存时，碘能以碘–淀粉蓝色化合物沉淀全部淀粉。将此沉淀溶于碱液，并在酸性条件下与碘作用形成蓝色溶液进行比色。

二、实验材料、试剂与仪器设备

（一）实验材料 任何植物材料。

（二）试剂 ． 80 ％硝酸钙溶液。． 0.5 ％碘液：称 5.00 g 结晶碘和 10.00 g 碘化钾，放入研钵混合干研，然后加 10 mL 蒸馏水研至全部碘溶解，将溶液全部转入 1000 mL 容量瓶定容后，贮于磨口试剂瓶。

3 ． 5 ％含碘硝酸钙溶液：取 10 mL 80 ％的硝酸钙溶液，加入 160 mL 水再加入 3 mL 0.5 ％的碘液混匀，现用现配。．标准淀粉溶液：称取纯淀粉 50 mg 于研钵中，加 3 mL 80 ％硝酸钙溶液，研细并转移到 100 mL 的三角瓶中，用 15 mL 80 ％的硝酸钙溶液冲洗研钵，无损地收集于三角瓶中。将三角瓶置于沸水浴中煮沸 5 min，冷却后全部转入 50 mL 容量瓶中并定容。此液为 1 mg/mL 的淀粉标准液。． 0.1 mol/L NaOH。6 ． 0.1 mol/L HCl。

（三）仪器设备

分析天平，研钵，容量瓶，量筒，三角瓶，水浴，小漏斗，电炉，离心机，离心管，试剂瓶。

三、实验步骤 ．称取 1 ～ 3 g 叶片，剪碎放入研钵，加 5 mL 80 ％的硝酸钙溶液，研磨成糊状移入 100 mL 的三角瓶中，用 10 mL 80 ％的硝酸钙冲洗研钵，无损地收集于三角瓶中，瓶口盖上小漏斗，在沸水浴上煮沸 3 ～ 5 min（叶片含淀粉少的 3 min，含淀粉多的 5 min），使样品中淀粉转变为胶体溶液。．给三角瓶中加 20 mL 蒸馏水，混合液转入离心管中离心（202_ ～ 3000 rpm）2 ～ 3 min，将离心后的淀粉胶体浑浊液移入 100 mL 容量瓶（淀粉含量少时，可移入 50 mL 容量瓶），三角瓶及离心沉淀物用 5 ～ 10 mL 热蒸馏水冲洗并同样离心，离心液并入容量瓶中（共洗 2 ～ 3 次）定容，即为淀粉提取液。．取 5 ～ 10 mL 淀粉待测液，加入到盛有 2 mL 0.5 ％碘液的离心管中，混匀静置 15 min 后离心（3000 rpm）5 min，弃上清液。沉淀用 5 ％的含碘硝酸钙溶液冲洗两次，向冲洗后的沉淀中加入 10 mL 0.1 mol/L 的 NaOH 混匀，将离心管浸入沸水内 5 min，使沉淀溶解。将溶液转入 50 mL 容量瓶中，加入 0.3 mL 0.5 ％碘液，用 30 mL 左右的水冲洗并入容量瓶，加入 2 mL 1mol/L 的盐酸，用水定容并显色，在 590 nm 波长处测定光密度。4 ．绘制标准曲线 取标准淀粉溶液（1 mg/mL）0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL 于 6 个离心管中，用 80 ％硝酸钙溶液将各管的体积补足至 5 mL，再向各管加入 2 mL 0.5 ％碘液，混匀静置 15 min 后离心，其他操作同样品测定步骤，显色后在 590 nm 波长下测定光密度。此系列溶液的淀粉含量分别为 0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mg，然后以光密度为横坐标，以淀粉含量为纵坐标绘制标准曲线。

四、结果计算 ：含量（%）=100*C*VT/V1*1000*W 式中： C ——从标准曲线查得淀粉量，mg。V T ——样品提取液总体积 , mL。V 1 ——显色时取样品液量，mL。W ——样品重（g）。

III 旋光法（谷物淀粉含量的测定）

一、原理： 酸性氯化钙溶液与磨细的含淀粉样品共煮，可使淀粉轻度水解。同时钙离子与淀粉分子上的羟基络合，这就使得淀粉分子充分地分散到溶液中，成为淀粉溶液。淀粉分子具有不对称碳原子，因而具有旋光性，可以利用旋光仪测定淀粉溶胶的旋光度（α），旋光度的大小与淀粉的浓度成正比，据此可以求出淀粉含量。溶提淀粉溶胶所用的酸性氯化钙溶液的pH值必须保持2.30，密度须为1.30，加时间的长短也要控制在一定范围。因为只有在这些条件下，各种不同来源的淀粉溶液的比旋度［α］才都是203°，恒定不变。样品中其他旋光性物质（如糖分）须预先除去。

二、材料、仪器设备及试剂：

（一）材料：面粉或其他风干样品

（二）仪器设备：1.植物样品粉碎机；2.离心机；3.分析天平；4.粗天平；5.旋光仪及附件；6.三角瓶；7.分样筛（100目）；8.布氏漏斗、抽滤瓶及真空泵；9.离心管；10.小电炉。

（三）试剂：

三、实验步骤：

1.样品准备：（1）称取样品：将样品风干、研磨、通过100目筛，精确称取约2.5g样品细粉（要求含淀粉约2g，请参考附注估计），置于离心管内。（2）脱脂：加乙醚数ml到离心管内，用细玻棒充分搅拌，然后离心。倾出上清液并收集以备回收乙醚。重复脱脂数次，以去除大部分油脂、色素等（因油脂的的存在会使以后淀粉溶液的过滤困难）。大多数谷物样品含脂肪较少，可免去这个脱脂手续。（3）抑制酶活性：加含有氯化高汞的乙醇溶液10ml到离心管内，充分搅拌，然后离心，倾去上清液，得到残余物。（4）脱糖：加80％乙醇10ml到离心管中，充分搅拌以洗涤残余物（每次都用同一玻棒），离心，倾去下清液。重复洗涤数次以去除可溶性糖分。

2.溶提淀粉：（1）加醋酸－氯化钙：先用醋酸氯化钙溶液约10ml加到离心管中，搅拌后全部倾入250ml三角瓶内，再用醋酸氯化钙溶液50ml分数次洗涤离心管，洗涤液并入三角瓶内，搅拌玻棒也转移到三角瓶内。（2）煮沸溶解：先用蜡笔标记液面高度，直接置于加有石棉网的小电炉上，在4min～5min内迅速煮沸，保持沸腾15min～17min，立即将三角瓶取下，置流水中冷却。煮沸过程中要时加搅拌，勿令烧焦；要调节温度，勿使泡沫涌出瓶外；常用玻璃将瓶侧的细粒擦下；并加水保持液面高度。

3.沉淀杂质和定容：（1）加沉淀剂：将三角瓶内的水解液转入100ml容量瓶，用醋酸氯化钙溶液充分洗涤三角瓶瓶，并入容量内，加30％ZnSO41ml混合后，再加15％K4Fe（CN）61ml，用水稀释至接近刻度时，加95％乙醇一滴以破坏泡沫，然后稀释到刻度，充分混合，静置，以使蛋白充分沉淀。（2）滤清：用布氏漏斗（加一层滤纸）吸气过滤。先倾清溶液约10ml于此滤纸上，使其完全湿润，让溶液流干，弃去滤液，再倾清溶液进行过滤，用干燥的容器接受此滤液，收集约50ml，即可供测定之用。

4.测定旋光度：用旋光测定管装满滤液，小心地按照旋光仪使用说明，进行旋光度的测定。淀粉（％）＝α×N×100/{[α]20D×L×(W－K)}×100 式中：α：用钠光时观测到的旋光度；［α］20 D：淀粉的比旋度，在这种方法条件下为203°；L：旋光管长度（cm）；W：样品质量（g）；K：样品水分含量（％）；N：稀释倍数；100：换算为百分率。也可以不用上列公式计算，改用工作曲线来求得淀粉含量，这样准确度高些。

Ⅲ、淀粉含量的测定

一、目的

掌握植物组织中淀粉含量测定的原理和方法。

二、原理

淀粉用盐酸水解转化成葡萄糖后，测定葡萄糖含量，根据葡萄糖含量换算成淀粉含量。

三、材料、仪器设备及试剂

材料、仪器设备及试剂与上述蔗糖的测定相同，另增加碘试剂；100ml、250ml容量瓶。碘试剂（碘化钾—碘溶液）的配制：称取碘化钾20g及碘10g溶于100ml蒸馏水中。使用前需稀释10倍。

四、实验步骤

1.葡萄糖标准曲线制作与上述还原糖含量测定相同。2.淀粉的水解

取上述还原糖含量测定中经85﹪乙醇浸提后的全部淀粉残渣，放入100ml三角瓶中，加 入6mol·L－1盐酸10ml，混匀，在沸水浴中加热10min－30min（用碘试剂检查淀粉水解程度，直至不显蓝色为止），再加蒸馏水20ml,摇匀并过滤于100ml容量瓶中，过滤后残渣再用蒸馏水冲洗3次，一并过滤入容量瓶，定容至100ml。准确取出10ml过滤液置入250ml容量瓶中，加酚酞2滴，用10﹪NaOH中和至微红色，用蒸馏水定容至250ml，待测。

3.还原糖含量测定

取4 支25ml刻度试管，编号，其中3支（三个重复）分别加入待测液2ml,1支空白管加2ml蒸馏水代替样品液，然后各管再加入DNS试剂1.5ml，摇匀，混合液在沸水浴中加热5min，然后用自来水冷却，各加入21.5ml蒸馏水使总体积为25ml，摇匀，在520nm波长下测定吸光度（A）值。

五、结果计算

根据待测液的吸光度从上述标准曲线中查出其相应的还原糖含量，然后按下公式计算出样品中还原糖（葡萄糖）含量和淀粉含量的百分率。

淀粉水解液总量（ml）从标准曲线上查得还原糖(mg)×————————————

测定时水解液用量（ml）

还原糖（﹪）= ———————————————————————————×100

（葡萄糖）样品重（mg）

粗淀粉含量（﹪）= 葡萄糖含量 × 0.9

式中系数0.9依据淀粉（C6 H10 O5）n水解时吸收n 个分子水。

第三篇：植物组织游离脯氨酸含量的测定

植物组织游离脯氨酸含量的测定

原理

植物在逆境条件下，游离脯氨酸便会大量积累，且积累指数与植物的抗逆性有关。因此，脯氨酸可作为植物抗逆性的一项生化指标。

采用磺基水杨酸提取植物体内的游离脯氨酸，不仅大大减少了其他氨基酸的干扰，快速简便，而且不受样品状态(干或鲜样)限制。在酸性条件下，脯氨酸与茚三酮反应生成稳定的红色缩合物，用甲苯萃取后，此缩合物在波长520nm处有一最大吸收峰。脯氨酸浓度的高低在一定范围内与其消光度成正比。材料、仪器设备及试剂 1．材料

植物叶片

2．仪器设备

分光光度计；水浴锅：漏斗：大试管(20m1)；具塞刻度试管(20m1)注射器或滴管(5～lOml)。3．试剂

(1)3％磺基水杨酸溶液

(2)甲苯；

(3)2.5％酸性茚三酮显色液：冰乙酸和6mo1.L-l磷酸以3:2混合，作为溶剂进行配制，此液在4℃下2～3天有效；

‘

(4)脯氨酸标准溶液：准确称取25mg脯氨酸，用蒸馏水溶解后定容至250ml，其浓度为100ug.mL-l。再取此液10ml，用蒸馏水稀释至lOOml，即成10μg．mL-1的脯氨酸标准液。

1．标准曲线制作

（1）取7支具塞刻度试管按表9.2-1加入各试剂。混匀后加玻璃球塞，在沸水中加热40min。

(2)取出冷却后向各管加入5ml甲苯充分振荡，以萃取红色物质。静置待分层后吸取甲苯层以0号管匀对照在波长520nm下比色。

（3）以消光值为纵坐标，脯氨酸含量为横坐标，绘制标准曲线，求线性回归方程

表9．2．1各试管中试剂加入量 试管

0

脯氨酸标准溶液(m1)

0

0．2

0．4

0．8

1．2

1．6

2．0

水(m1)

1．8

1．6

1．2

0．8

0．4

0

冰乙酸(m1)

茚三酮显色液(m1)

样品测定

（1）脯氨酸提取：取不同处理的剪碎混匀植物叶片0．2～0．5g(干样根据水分含量酌减)，分别置于大试管中，加入5m1 3％磺基水杨酸溶液，管口加盖玻璃球，于沸水浴中浸提10min。

(2)取出试管，待冷却至室温后，吸取上清液2m1，加2m1冰乙酸和3m1显色液，于沸水浴中加热40min，下步操作按标准曲线制做方法进行甲苯萃取和比色（向各管加入5ml甲苯充分振荡，以萃取红色物质。静置待分层后吸取甲苯层以0号管匀对照在波长520nm下比色）。

(3)结果计算：从标准曲线中查出测定液中脯氨酸浓度 脯氨酸含量的百分数。

脯氨酸[μg.g-1(干或鲜重)](C．V)·(a·W)－1

式中：C一提取液中脯氨酸浓度(PS)，由标准曲线求得：

V － 提取液总体积（ml）

A---测定时所吸取得体积（ml）

W-----样品重（g）

第四篇：甘油含量测定

嗯。你都问到这个问题了，具体仪器、操作什么的我就不说了。就说一下思路。

强碱条件下甘油和二价铜的络合物显绛蓝色，所以利用甘油的这个特性就可以轻松搞定。

主要试剂是AR级的甘油、氢氧化钠、硫酸铜。

向氢氧化钠碱化的甘油溶液里加硫酸铜，一定要保证甘油被完全络合，并且保证多余的二价铜都以氢氧化铜沉淀形式存在，但是氢氧化钠也不要加太多。

甘油铜可见区最大吸收波长是在630nm。

先作个标准系列，绘出吸光度-浓度曲线，然后把待测试样吸光度测出来在标准曲线上一算，浓度就得到了。

氢氧化铜解离出来的铜离子在630nm处也有吸收，好在它是一个定值，测出来后从每个甘油的A里面扣掉就行了。

甘油含量化学方法有很多，比色法，滴定法．甘油在强碱性条件下，与Cu2+定量形成绛蓝色的甘油铜溶液。根据朗伯-比尔定律，溶液吸光度A与吸光物质浓度C成正比：A=kC。甘油配制浓度C1与衍生的分析甘油铜浓度C有如下关系：C=k1C1，k1为稀释系数，则吸光度值与甘油配制浓度有如下正比关系： A=kk1C1+ε，k、k1为常数，ε为系统误差。

先根据吸光度与甘油配制浓度C1做出关系曲线:，然后确定最佳线性拟合范围，最终得出拟合线性方程，程序化后，用于甘油含量的快速测定。

[供应] 拜发甘油检测试剂盒

发布日期：202_-9-21

截止日期：202_-5-9

拜发甘油检测试剂盒（酶学试剂盒）订货号： 10148270035 产品名称： 甘油（Glycerol）产品英文名称： Glycerol 包装： Ca.3 x 11 tests 产品介绍： 如下

产品说明： Glycerol（用于检测食品中的甘油）

酶法分析试剂盒（紫外分光光度法）

RIDASCREEN（产品编号：0 414 433）30次检测

1.简介

酶法分析试剂盒（紫外分光光度法）此法适用于检测食品（啤酒、葡萄汁、醋、蜂蜜、酒精、果酒）、化妆品、药品（溶液、栓剂）、纸板、烟草及生物制品中的甘油。2.原理

甘油在甘油激酶的催化下可被ATP磷酸化为3-磷酸甘油酯，ATP转化为ADP； 反应式为 GK Glycerol﹢ATP L-glycerol-3-phosphate﹢ADP 上式中形成的ADP在丙酮酸激酶的催化下可与PEP作用下生成ATP及丙酮酸酯； 反应式为 PK ADP﹢PEP ATP﹢Pyruvate 丙酮酸酯在L-乳酸酯脱氢酶的作用下可被NADH还原为L-乳酸酯，NADH被氧化为NAD； 反应式为 L-LDH Pyruvate﹢NADH﹢H﹢ L-lactate﹢NAD﹢

被氧化的NADH的量取决于甘油的量，NADH的吸光度值可在334，340及365nm下测量。3.试剂盒内容物

－－－－瓶1共有3瓶，每瓶约有2g辅酶及缓冲液的混和物，包括：甘氨酰甘氨酸缓冲液，PH约7.4； NADH约7mg；ATP约22mg；PEP-CHA约11mg；硫酸镁 －－－－瓶2约0.4ml悬浮物，包括：

丙酮酸激酶，约240U； L-乳酸酯脱氢酶，约220U －－－－瓶3约0.4ml甘油激酶悬浮物，约34U －－－－瓶4为甘油检测对照溶液（甘油检测对照溶液可不需要计算结果），此溶液使用时不需稀释。（效期见标签）

4.检测溶液的制备（10次）

－－－－取出1瓶瓶1，用11ml重蒸水溶解，使用时此溶液需在20-25℃持续回温约10分钟 －－－－瓶 2不需稀释 －－－－瓶 3不需稀释 5.操作者应该注意之事项

使用前请仔细阅读，中文翻译件仅供参考

－－－－瓶1约含500mg碳酸钠，应避免接触皮肤和呼吸器官，其他用于甘油检测的试剂不具有危险性 －－－－实验之后，用过的试剂可作为实验室废料处理，但必须在当地法规允许的前提下 6.储存条件

－－－－瓶 1在2-8℃下保存（见标签），溶液1在2-8℃下可保存4天，溶液1使用前需回温至20-25℃

－－－－瓶2及3在2-8℃下保存（见标签）7.样品处理

－－－－直接取用无色，透明，中性的溶液或按稀释表格稀释后进行检测，体积为2.000ml －－－－过滤混浊溶液

－－－－除去样品溶液中的二氧化碳气体

－－－－加入氢氧化钠或氢氧化钾来调节酸溶液的PH值约为8 －－－－对于深颜色的样品溶液可不需稀释或者用PVPP或酰胺配成较高浓度的溶液如：1g/100ml －－－－粉碎或均质固体和半固体样品，用水抽提或溶解，而后过滤，通过Carrez澄清液可脱去其中的混浊物或色素

－－－－用Carrez试剂可脱去样品中的蛋白质

－－－－用热水抽提样品中的脂肪（抽提温度需在脂肪的溶解度之上），冷却后可分离出脂肪，将余下物质转移至容量瓶中并加水至刻度，冰浴15分钟而后过滤，热水抽提后用Carrez溶液澄清 8.过程

1.波长：340nm，Hg365nm或Hg334nm 2.比色杯：光径1.0cm 3.温度：20-25℃ 4.最终体积：3.020ml 5.对照空气（光路上无比色杯）或对照水读取读数

6.样品溶液：1-40ug甘油/检测（体积为0.100-2.000ml样品体积）7.具体操作见如下表格 移液 空白（ml）样品（ml）溶液1 样品溶液 重蒸水 悬浮物2 1.0001﹢9 1﹢99 1﹢999 1 10 100 1000 如果测得的吸光度值△A较低，例如低于0.100，则样品溶液需重新配制，可由下列几种解决方法 1.可多称出些样品或不要过分稀释。

2.加入到比色杯中的溶液体积可增加至2.000ml，当然为了得到相同的最终体积（样品和空白），加入的水的体积就要相应减少。所加入的新溶液的体积在计算时是要考虑进去的。11.技术信息

加入悬浮物2（PK/L-LDH）后等待前反应进行完全后是非常必要的。12.特性

此法特异性适于甘油的检测。13.灵敏度和检测限

1.最小的吸光分辨率为0.005个吸光单位，相应的最大样品体积为2.000ml，340nm下测量，则样品的甘油浓度为0.1mg/L；若样品体积为0.100ml，则样品的甘油浓度为2mg/L。

2.340nm下，吸光度值差为0.020可导出检测限为0.4mg/L，相应的最大体积为2.000ml。14.线性

从1ug甘油/检品（0.4mg甘油 /L样品溶液，样品溶液V=2.000ml）到40ug甘油/检品（0.4g甘油/L样品溶液，样品V=0.100ml）15.精确性

用同一样品溶液做平行测定时，其吸光度值差会有0.005至0.010的差异，样品体积为0.100ml，340nm下测量，相应的甘油浓度约为2-5mg/L；若样品是经过稀释的，则在计算结果时需乘以稀释倍数。16.干扰信息来源

ATP和PEP的缓慢水解同NADH的缓慢氧化均可导致缓慢的蠕变反应；空白和样品的吸光度值可不必逐一立即检测。

17.检测过程中的干扰

1.根据过程中所给定的时间甘油若能转化完全，则可断定没有干扰发生。

2.反应结束后，可加入一些甘油重新检测（定性或定量）：如果加入标准物质后，吸光度值会随之改变，则可断定没有干扰发生。

3.操作过程中的错误和干扰可通过两个样品体积的平行实验测得（如0.100ml和0.200ml）：测得的吸光度值差应与样品体积成比例关系。

当测定固体样品时，可称取不同质量（如1g和2g）于同一100ml容量瓶中，测得的吸光度值差及样品的质量应与样品的体积成比例关系。

4.样品所含物质带来的可能干扰可通过加入内标来控制：除去样品、空白及标准的检测外，样品加检测对照溶液也要检测的，测得的吸光度值差可计算干扰。

5.通过回收试验可测定可能的损失：分别测定加入标准与不加入标准的样品，在误差范围之内可定量测定附加物。

18.Carrez试剂的澄清作用

－－－－移取液体样品于盛有60ml重蒸水的100ml容量瓶中或称取足够重量的样品于100ml容量瓶中 －－－－加入60ml重蒸水

－－－－仔细加入5mlCarrez-Ⅰ-溶液（85mM，3.60gK4Fe（CN）6*3H2O/100ml）和5ml Carrez-Ⅱ-溶液（250mM，7.20gZNSO4*7H2O/100ml）

－－－－用氢氧化钠调节溶液PH于7.5-8.5，加入每一溶液后需充分混和，加水至容量瓶刻度，混和并过滤

19.应用举例 1.果汁中甘油的检测 －－－－稀释样品其浓度约在0.4g/L以下（见稀释表格）－－－－过滤混浊果汁，取用透明或淡色溶液用于检测 当分析深色果汁时（如：草莓汁和红葡萄汁）需要先脱色 具体操作

－－－－在10ml果汁中加入0.1g酰胺粉末或PVPP －－－－搅拌1分钟后过滤

－－－－取透明溶液用于检测，该溶液可带有轻微颜色 2.酒中甘油的检测

－－－－根据稀释表格将样品进行稀释 －－－－实际上红酒不需脱色也可进行检测 3.啤酒中甘油的检测

－－－－取5-10ml啤酒用玻璃棒搅拌约1分钟，除去其中的二氧化碳气体 －－－－根据稀释表格稀释脱去二氧化碳气体后的样品 4.烟草制品中甘油的检测 －－－－充分混合并绞碎样品

－－－－精确称取1g样品于100ml容量瓶中

－－－－加入约70mL水磁力搅拌约1小时20-25℃下，而后加水至刻度，混和并过滤 －－－－移取25ml滤液于50ml容量瓶中

－－－－加入5mlCarrez-Ⅰ-溶液，5ml Carrez-Ⅱ-溶液及10ml氢氧化钠溶液，在加入每一溶液后均需充人混和

－－－－加水至刻度混和并过滤，取滤液用于检（0.100ml-0.500ml）5.化妆品中甘油的检测

6.发酵产品及生物培养基中甘油的检测

－－－－置样品（可先经过离心）于80℃水浴中15分钟以停止酶的反应 －－－－离心并取上层溶液（可根据稀释表格稀释）用于检测 －－－－另外可用高氯酸或Carrez溶液脱除蛋白质 琼脂培养基需先均质，而后按以上方法进行操作。

名称：甘油检测试剂盒 编号：EK-GCROL 货号：100001001 Cas No：70

购买：

Glycerol Assay Kit(70 次测定)简介: 甘油是一种非常重要的物质，广泛的应用于工业生产中，在食品工业中，常被作为保湿剂、增香剂和增色剂等使用，以改良食品的质量。甘油是酿酒酵母发酵过程中的副产物,也是灰质葡萄孢新陈代谢过程中的一个重要产物，甘油是高品质果酒的一个成分，高品质的葡萄汁中不含有(或只含有痕量或微量)甘油，浓度大约为1%(v/v)，若葡萄汁中含有甘油则意味着产品中使用了品质不好的原料。甘油也常常作为润滑剂用在洗涤液、乳酪和牙膏中，在制烟工业中，通过通常是预先向烟叶上喷洒甘油以保障不会粉碎的目的。

原理: 甘油在甘油激酶(GK)的作用下被磷酸化，消耗ATP转化成L-3磷酸甘油（L-glycerol-3-phosphate）。

(1)Glycerol + ATP(GK)L-glycerol-3-phosphate + ADP

上式中形成的ADP在丙酮酸激酶(PK)的催化下可与PEP作用，生成ATP及丙酮酸酯

(2)ADP + PEP(PK)ATP + pyruvate

丙酮酸酯在L-乳酸酯脱氢酶(L-LDH)的作用下可被NADH还原为L-乳酸酯，NADH被氧化为NAD

(3)Pyruvate + NADH + H+(L-LDH)L-lactate + NAD+

被氧化的NADH的量取决于甘油的量，NADH的吸光度值可在340下测量。

特异性, 灵敏度, 测量范围和精确度: 该实验方法是专门用于测定甘油含量的，对于纯甘油（水中的游离甘油）几乎可以100%检测到。最小可调吸光光度为0.010个吸光单位，样品体积为2.00 mL，若在340nm下检测,此时的甘油浓度为0.171 mg/L。如果最小可调吸光光度为0.020吸光光度，样品体积为2.00 mL，在340nm下检测,此时的甘油检测线为0.342 mg/L。

该实验的测量范围为0.8ug-35ug甘油，同一样品分别进行两次测定，其吸光度值会有0.005-0.010吸光单位的变化，对于样品体积为2.00 mL，此时的甘油浓度大约在0.086-0.171 mg/L之间，如果样品是经过稀释的，在计算结果时候需要乘以相应的稀释系数（F）,如果在样品制备阶段，样品的重量是被称量的，如：10g/L,0.02-0.05g/100g的细微差别能够被分辨。

干扰: 如果甘油在试验规定的时间内（大约5分钟）完成转化过程，通常认为没有干扰发生，然而，通过向已完成反应的试管中添加甘油（0.1mL中添加20ug），进一步的实验表明，吸光度值还会进一步降低。利用附带的内部的标准质控可以对干扰物质进行鉴定。定量回收试验：通过向样品中添加标准质控，计算样品在处理和提取时的损失。如：在最初的提取步骤时添加一定量的甘油。

安全性: 甘油测定所使用的试剂没有有毒物质。然而浓缩缓冲液中含有作为防腐剂用的叠氮化钠(0.02 % w/v)，需要按照实验室安全操作规程进行试验。

试剂盒: Megazyme甘油含量测定试剂盒可以进行70次的测定试验，并提供有全部的试验方法：

瓶1: Tris/HCl 缓冲液(30 mL, 1.0 M, pH 7.4)+氯化镁(30 mM)+叠氮化钠(0.02 % w/v)稳定性> 2年，4°C保存。瓶2: 药片(14个)含有NADH+ATP +PEP 稳定性> 2年，4°C保存。

瓶3: 丙酮酸激酶(600 U/mL)+L-乳酸酯脱氢酶(550 U/mL)悬浮液1.5mL 稳定性> 2年，4°C保存。

瓶4: 甘油激酶悬浮液(1.5 mL, 85 U/mL)稳定性> 2年，4°C保存。

瓶5: 甘油质控标准液(5 mL, 0.20 mg/mL)+ 0.02 %(w/v)叠氮化钠 稳定性> 2年，4°C保存。

试剂制备: 1.使用瓶1作为稀释液。

2.1.1 mL Tris/HCl缓冲液溶解瓶2中1片药片，大约1-2分钟，足够进行5次试验。一旦药片溶解，NADH吸光度会随着时间的延长而降低，不过溶解的药片保存在4°C下大约可以使用4天，或保存于-20°C下大约可以使用4周的时间。

注意: 在打开瓶子前，首先需要将瓶子中的药片恢复到室温，避免潮气可能吸附到药片上，而影响药片的稳定性。& 4.准备瓶3和瓶4种的溶液，第一次打开前，需要充分晃动瓶子，不要让酶吸附在橡皮塞上，然后垂直存放好瓶子。每次使用前还需要充分混合其中的内溶物。5.准备瓶5溶液。

注意:当您怀疑分光光度计的准确性或怀疑样品中的物质抑制了试验，再使用甘油标准质控溶液进行测定，通过测量NADH的消光系数而计算甘油的浓度。

实验需要的设备: 1.容量瓶(50 mL, 100 mL和500 mL).2.比色杯(1 cm, 3.0 mL).3.微量移液器 4.连续分配器 5.分析天平

6.分光光度计 340 nm.7.漩涡混合器 8.定时钟

9.Whatman No.1(9 cm)滤纸

操作步骤: 波长: 340 nm 比色杯: 1 cm light path(玻璃或塑料)温度: 25°C 最终体积: 2.34 mL 样品溶液: 每个比色杯中含有0.8-35ug甘油（存在于0.10-2.0 mL样品溶液中）空白调 0：相对于空气或者水 溶液 空白管 样品管 蒸馏水(~ 25°C)样品

溶液2(NADH/ATP/PEP/Tris/HCl)悬浮液3(PK/L-LDH)2.10 mL — 0.20 mL 0.02 mL 2.00 mL 0.10 mL 0.20 mL 0.02 mL 混合*，在反应大约4分钟后读取溶液(A1)的吸光度值（前反应完成**），在添加下列试剂后继续进行试验 悬浮液4(GK)0.02 mL 0.02 mL 混合*，在停止反应后（大约5分钟）读取溶液(A2)的吸光度值，如果反应没停止，在间隔2分钟后，再次测量，直到最终的吸光度值不再变化。

* 用塑料棒搅拌或用试管塞封闭严实后轻轻颠倒 ** 必须在等到前反应完成后再添加悬浮液3(PK/L-LDH)计算: 分别对空白管和样品管两次测得的吸光度值进行相减(A1-A2)，这样就获得了ΔAglycerol，按照常规ΔAglycerol 的数值至少要在0.100个吸光单位，才能获得满意的试验结果。

甘油的含量可以依照下列公式计算:

C = V x MW x ΔAglycerol [g/L] εx d x v

注释: V = 最终体积 [mL] MW = 甘油分子量 [g/mol] ε = NADH在340 nm下的消光系数 = 6300 [l x mol-1 x cm-1] d = 比色管管径 [cm] v = 样品体积 [mL]

简化公式:

C = 2.34 x 92.1 x ΔAglycerol [g/L] 6300 x 1 x 0.10 = 0.3421 x ΔAglycerol [g/L]

如果样品在制备过程中被稀释了，计算结果还必须乘以稀释系数F。

当被分析的物质为固体或半固体时，甘油含量(g/100 g)依照下列公式计算： 甘油含量

= C甘油 [g/L 样品溶液] x 100 [g/100 g] 样品重量 [g/L 样品溶液]

注意: 使用Mega-CalcTM，该计算方法可以被简化。

制备样品: 1.稀释样品.比色杯中（如：分析0.1 mL的样品）的甘油总含量必须在0.8-25ug之间，因此样品溶液必须被充分的稀释到浓度在0.008-0.35 g/L之间。估计浓度(g/L)蒸馏水稀释 稀释系数F < 0.35 0.35-3.5 3.5-35 > 35 不用稀释 1 + 9 1 + 99 1 + 999 1 10 100 1000

如果ΔAglycerol 的数值太低(如< 0.100)，可以增加称量的样品量或不要进行过分稀释，也可以增加比色管中的样品量到2.00 mL，只要确保样品和蒸馏水的总量在2.10 mL即可。2.净化样品.a.溶液: Carrez I溶液：溶解3.60 g亚铁氰化钾{K4[Fe(CN)6].3H2O}(Sigma cat.no.P-9387)到100 mL的蒸馏水中，室温保存。

Carrez II溶液： 溶解7.20 g硫酸锌(ZnSO4.7H2O)(Sigma cat.no.Z-4750)到100 mL的蒸馏水中，室温保存。

氢氧化钠(NaOH, 100 mM)：溶解4 g NaOH到1 mL的蒸馏水中，室温保存。

b.步骤: 吸取液体样品到含有大约60 mL蒸馏水的100 mL容量瓶中，或称取足够量的样品到含有大约60 mL蒸馏水的100 mL容量瓶中，缓慢的加入5mL Carrez I 溶液和10mL NaOH溶液(100 mM)，然后充分混合，补液至刻度线，混合并过滤。3.总则.(a)液体样品: 清澈的或稍有些颜色的，pH大约为中性的液体样品可以直接检测。

(b)酸性样品: 如果样品为> 0.1 mL的未被稀释的酸性样品（如葡萄酒或果汁），必须用2 M NaOH调节pH到大约7.4，然后在室温中孵育30分钟。

(c)含二氧化碳样品: 样品中含有大量的二氧化碳，如：啤酒，必须用2 M NaOH调节pH到大约7.4，并缓慢的用玻璃棒搅拌。

(d)有颜色的样品: 测试中附加样品空白，如：样品中不含有GK，在这种情况下，样品必须附加样品空白。(e)重颜色的样品: 如果未经稀释的样品颜色非常深，需要向每10mL的样品中加入0.2g聚乙烯聚吡咯烷酮（PVPP），充分混合5分钟，然后用Whatman No.1滤纸过滤。(f)固体样品: 均质或粉碎固体样品，然后加入到蒸馏水中，并过滤。

(g)样品含有脂肪: 需要用超过脂肪沸点的水进行提取，如：将100mL容量瓶加热到60°C，然后恢复至室温，并补液至刻度线，放置冷藏箱中15-30分钟，过滤，弃去最初的几mL滤液，选择澄清的或稍有些乳白色的悬浮液进行测试。也可以选择使用Carrez 溶液进行澄清。(h)样品中含有蛋白: 使用Carrez 溶液去除样品中的蛋白。

样品处理事例:(a)测定葡萄酒中的甘油.通常情况下，测定白/红葡萄酒中的甘油含量都不需要对样品进行处理，只需要依照稀释表格进行稀释即可。如：按照1:20倍稀释0.1mL的样品。

(b)测定啤酒中的甘油含量.使用玻璃棒进行充分的搅拌，去除样品中的二氧化碳，然后进行稀释即可测定。如：按照1:5倍稀释0.1mL的样品。

(c)测定果汁和相关饮料中的甘油含量

稀释样品中的甘油含量至少到0.35 g/L，澄清的、中性的样液可以直接进行测试，不需要进行特殊处理。浑浊的液体稀释前首先需要进行过滤。

有颜色的样品溶液通常在稀释到适当的甘油浓度即可测定。然而，如果要测定不经稀释的样品液中的甘油浓度，需要依照下列步骤进行脱色：

用1 M NaOH调节25mL样品溶液的pH大约至7.4，然后用蒸馏水补液至50 mL，加入0.5g PVPP，充分搅拌5分钟，然后用Whatman No.1滤纸过滤。使用澄清的或稍有些颜色的提取液进行测试。没有必要进一步稀释，可以直接进行测定。

(d)测定烟草制品中的甘油含量.将样品粉碎成大约0.2 mm的小颗粒，准确的称量1g样品，放入到100 mL容量瓶中，加入大约60 mL蒸馏水，用磁力搅拌器在20-25°C下充分搅拌1小时，然后用蒸馏水补液至刻度线，混合并过滤。移取25 mL滤液到50mL容量瓶中，继续加入5 mL Carrez I 溶液、5 mL Carrez II 溶液和10 mL NaOH溶液(100 mM)，每加一种溶液都要充分混合，然后补液至刻度线，混合并用Whatman GF/A玻璃纤维滤纸过滤，没有必要进一步稀释，可以直接进行测定。

(e)测定肥皂中的甘油含量.准确称取1 g粉碎的肥皂粉末，加入50mL 0.1M HCl，用热磁力搅拌器充分搅拌至沸腾，将溶液转移至100 mL容量瓶中，然后添加30mL 0.1M HCl继续搅拌提取，待温度降至20-25°C后用蒸馏水补液至刻度线，将容量瓶放置于冷藏室15分钟，用Whatman GF/A玻璃纤维滤纸过滤，取25 mL滤液，加入2 mL 2 M Tris/HCl 缓冲液（pH 7.4，自备），用1M NaOH调解pH大约至7.4，补液至50 mL，直接对该溶液（或进一步稀释）进行测定。

(f)测定牙膏中的甘油含量.准确称取1 g牙膏样品，加入70 mL蒸馏水，在70°C下充分搅拌30分钟，然后离心(~ 3,000g 10分钟)，再次洗涤悬浮液中的小球2次—加入50 mL蒸馏水，重复搅拌和离心步骤，补液至250 mL并过滤，可以按照1:3倍稀释0.1 mL滤液，进行测定。

参考文献: 1.Spinella, C.I.(1966).Modified enzymatic procedure for the routine determination of glycerol and triglycerides in plasma.J.Lipid Res.7,167-169.2.Klopper,W.J.,Angelino, S.A.G.F.,Tuning, B.& Vermeire, H.A.(1986).Organic acids and glycerol in beer.J.Inst.Brew.92, 225-228.3.Michal, G.(1976).Enzymatische analyse in der pharmazie.Acta Pharmaceutica Technologica, Suppl.1,S, 151-162.4.Pfandl,A.& Menschig, D.(1984).Ein beitrag zur enzymatischen glycerinund ethanol-bestimmung.Pharm.Ind.46, 403-407.5.Wieland, O.H.(1988).Glycerol.In Methods of Enzymatic Analysis(Bergmeyer, H.U., ed.), 3rd ed., Vol.VI, pp.504-510,VCH Publishers(UK)Ltd., Cambridge, UK.

第五篇：油菜中Vc含量的测定

分析化学开放性试验 ——油菜中维C含量的测定

目录

1.引言

1.1油菜简介

1.2维C的性质与作用 1.3碘量法简介

2.实验研究的对象及意义

3.实验仪器和试剂

4.实验原理

5.实验步骤

5.1 0.5%淀粉液的制备

5.2 0.001mol/L KIO3溶液的制备

5.3样品试液的制备

5.4样品液的滴定

6.实验结果与数据处理

7.实验总结

7.1结果分析

7.2心得体会

8.参考文献

1.引言

1.1油菜简介

油菜：

中文名： 油白菜。拉丁学名：Brassica campestris L.别名： 芸苔、寒菜、青江菜、青菜、上海青、胡菜、苦菜、苔芥、青菜、瓢儿菜、勺菜。又名芸薹、胡菜、薹菜。油菜按其叶柄颜色不同有白梗菜和青梗菜两种。白梗菜，叶绿色，叶柄白色，直立，质地脆嫩，苦味小而略带甜味。青梗菜，叶绿色，叶柄淡绿色，扁平微凹，肥壮直立，植株矮小，叶片肥厚。质地脆嫩，略有苦味。油菜又叫青菜，颜色深绿。油菜为十字花科，芸苔属，一年生草本。直根系。茎直立，分枝较少，株高30-90cm。叶互生，分基生叶和茎生叶两种。基生叶不发达，匍匐生长，椭圆形，长10-20cm，有叶柄。

油菜的招牌营养素含量及其食疗价值可称得上诸种蔬菜中的佼佼者。

每100克可食部分含水分93克，蛋白质2.6克，脂肪0.4克，碳水化合物2.0克，维生素 0.5克，钙140毫克，磷30毫克，铁l.4毫克，维生素A3.15毫克，B10.08毫克，B20.11毫克，维生素C51毫克，尼克酸0.9毫克，胡萝卜素3.15毫克。所含的矿物质能够促进骨骼的发育，加速人体的新陈代谢和增强机体的造血功能，胡萝卜素、烟酸等营养成分，也是维持生命活动的重要物质。

1.2维C的性质与作用

维生素C又叫抗坏血酸，是一种水溶性维生素。无色晶体，熔点是 190-192℃，紫外吸收最大值为245nm，分子式：C6H8O6 酸性，具有较强的还原性，加热或在溶液中易氧化分解，在碱性条件下更易被氧化,为己糖衍生物。

维生素c的主要作用是提高免疫力，预防癌症、心脏病、中风，保护牙齿和牙龈等。另外，坚持按时服用维生素c还可以使皮肤黑色素沉着减少，从而减少黑斑和雀斑，使皮肤白皙。富含维生素c的食物有花菜、青辣椒、橙子、葡萄汁、西红柿等，可以说，在所有的蔬菜、水果中，维生素c含量都不少。

维生素C在体内参与多种反应，如参与氧化还原过程，在生物氧化和还原作用以及细胞呼吸中起重要作用。从组织水平看，维生素C的主要作用是与细胞间质的合成有关。包括胶原，牙和骨的基质，以及毛细血管内皮细胞间的接合物。因此，当维生素C缺乏所引起的坏血病时，伴有胶原合成缺陷，表现为创伤难以愈合，牙齿形成障碍和毛细血管破损引起大量瘀血点，瘀血点融合形成瘀斑。

1.3碘量法简介

碘量法是氧化还原滴定法中，应用比较广泛的一种方法。碘可做为氧化剂而被中强的还原剂所还原；碘离子也可做为还原剂而被中强的或强的氧化剂所氧化。

直接碘量法

可用淀粉指示剂指示终点。淀粉遇碘显蓝色，反应极为灵敏。化学计量点稍后，溶液中有过量的碘，碘与淀粉结合显蓝色而指示终点到达。直接碘量法还可利用碘自身的颜色指示终点，化学计量点后，溶液中稍过量的碘显黄色而指示终点。，间接碘量法

在供试品（还原性物质）溶液中先加入定量、过量的碘滴定液，待I2与测定组分反应完全后，然后用硫代硫酸钠滴定液滴定剩余的碘，以求出待测组分含量的方法。

2.实验的研究对象及意义

本实验通过测定油菜中维生素C的含量，了解间接碘量法的原理，掌握维生素C的测定方法，从而学会测定果蔬中Vc含量。

3.实验仪器和试剂

锥形瓶、烧杯、滴定管、分析天平。新鲜油菜、碘酸钾、碘化钾、淀粉，2%盐酸。

4.实验原理

本试验是利用碘酸钾做氧化剂。即在一定量的盐酸酸性试液中加碘化钾—淀粉指示剂，用已知浓度的碘酸钾滴定。当碘酸钾滴入后即释放出游离的碘，此碘被维生素C还原，直至维生素C完全氧化后，再滴以碘酸钾液时，释放出的碘因无维生素C的作用，可使淀粉指示剂呈蓝色，即为中点，其反应如下：

KIO3 + 5KI + 6HCl=6KCl + 3H2O + 3 I2 5.实验步骤

5.1 0.5%淀粉液的制备

称取可溶性淀粉0.5g，用蒸馏水调成浆状，注入100ml蒸馏水，煮沸至透明状，冷后用棉花过滤。

5.2 0.01mol/L KIO3溶液的制备

精确称取KIO3 0.0893g，准确配成250ml，得到0.01mol/l KIO3液。

5.3样品试液的制备

将600g油菜洗净，每次称取200g，放入榨汁机中，加2%的盐酸5―10ml，榨成糊状。小心无损的立即将油菜糊转移至锥形瓶中，立即进行滴定。

5.4样品液的滴定

取1%的KI 0.5ml，0.5%淀粉液2ml，以及至样品液锥形瓶中，用0.01mol/l KIO3溶液滴定，要一滴一滴缓慢加入，并时时摇动锥形瓶，至微蓝色不褪为终点（一分钟不褪为止）。记录所用KIO3溶液毫升数。

平行滴定3次。用各次测定的平均值，计算维生素C含量。

6.实验结果与数据处理

组别

KIO3体积/ml

18.79

18.82

18.81 w(Vc)/mg/100g

49.61

49.68

49.66 w平均值

49.65 偏差/%

绝对偏差/‰

-0.8

0.6

0.2

注：

W=[（3*0.01*V*M）/200]*100 W = 100克样品含的Vc毫克数。V = 滴定样品时所用的KIO3体积。0.01 = KIO3浓度。M= VC相对分子质量。200= 样品的克数。

7.实验总结

7.1结果分析

维C含量：第一组49.61mg/100g，第二组49.68 mg/100g，第三组49.66mg/100g。标准含量为51mg/100g。产生误差的原因可能是油菜糊转移不完全或Vc在空气中氧化所致。也有可能是滴定中终点的把握与读数不准确造成的误差。

7.2心得体会

这次测定蔬菜中Vc含量实验让我更加熟练了碘量法这一实验方法，同时让我从查阅资料中认识到了Vc的重要性。

1、促进骨胶原的生物合成。利于组织创伤口的更快愈合；

2、促进氨基酸中酪氨酸和色氨酸的代谢，延长肌体寿命。

3、改善铁、钙和叶酸的利用。

4、改善脂肪和类脂特别是胆固醇的代谢，预防心血管病。

5、促进牙齿和骨骼的生长，防止牙床出血，防止关节痛、腰腿痛

6、增强肌体对外界环境的抗应激能力和免疫力。

7、水溶性强抗氧化剂，主要作用在体内水溶液中。

8、坚固结缔组织。

9、促进胶原蛋白的合成，防止牙龈出血。

所以我们应重视每日摄入的Vc量，过多或过少都会影响身体健康。

这次实验是一次开放性实验，从选择课题到实验总结都是自己完成，是我的动手能力与主动思考能力有了很大的进步，是我人生的一次与众不同的尝试。

通过此次实验也认识到了自身的很多不足之处，例如基础知识不够扎实，基础实验操作不够熟练，思考问题不够全面，所以今后做实验时应主动思考原理、方法，一步步培养自己的实验能力。

8.参考文献

《基础化学实验（上册）》徐家宁 门瑞芝 张寒琦编 高等教育出版社

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